中华烧伤与创面修复杂志

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李校堃

2020, 36(3): 161-165. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200305-00125

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摘要:
自20世纪初发现成纤维细胞生长因子(FGF)后，研究发现其在发育、代谢调控和组织再生等方面均发挥着重要作用。FGF治疗可成为创面修复重要的疗法之一，然而在其成药过程中却遭遇了重大技术瓶颈。自1992年开始，笔者团队不断突破FGF成药技术瓶颈，成功开发多个一类新药及医疗器械。与此同时还深入研究FGF的代谢调控网络及信号转导机制，努力开发FGF新药，造福广大患者。

组织工程皮肤现状与挑战

肖仕初, 郑勇军

2020, 36(3): 166-170. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20191202-00449

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摘要:
自体断层皮片移植仍是修复皮肤缺损的重要方法，但存在一些明显的不足，如供皮区损伤、皮源不足等。研发组织工程皮肤实现缺损皮肤的永久性替代是一个理想目标。经过几十年的发展，多种组织工程皮肤已被投入市场使用，但要实现皮肤缺损的再生修复还有很长的路要走。本文总结组织工程皮肤的现状，并对组织工程皮肤发展所面临的机遇和挑战做初步探讨。

含异体角质形成细胞和成纤维细胞的细胞膜片治疗Ⅱ度烧伤创面的临床研究

姜耀男, 王雨翔, 郑勇军, 胡晓燕, 何飞, 施文钧, 吴琼, 夏照帆, 肖仕初

2020, 36(3): 171-178. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20191113-00426

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摘要:
目的临床评价含异体角质形成细胞(KC)和成纤维细胞(Fb)的细胞膜片治疗Ⅱ度烧伤创面的效果与安全性。方法以聚氨酯生物膜为载体构建含人异体KC和Fb的细胞膜片，行大体和组织学观察。2016年4月—2017年12月，海军军医大学附属长海医院对符合入选标准的急性Ⅱ度烧伤创面的患者进行前瞻性、阳性自身对照的临床试验。拟入组40个急性Ⅱ度烧伤创面，选择的单个创面≥10 cm×10 cm且≤5%体表总面积(TBSA)，将创面均分为2个区，采用随机数字表法分别纳入细胞膜片组和常规治疗组。细胞膜片组创面内层覆盖细胞膜片、外覆无菌植皮纱布，视创面愈合及渗出情况于治疗开始后每1～3天更换外层纱布，每7天更换1次细胞膜片(即该组换药)。常规治疗组创面内层覆盖混合磺胺嘧啶银霜的纱布、外覆无菌植皮纱布，视创面渗出情况每2～3天更换内外层纱布。分别于治疗5、7、10、14 d，计算2组创面愈合率；记录创面完全愈合时间、换药总次数、治疗期间创面感染情况；首次换药时采用视觉模拟评分法进行疼痛评分；伤后6～12个月，随访创面瘢痕形成情况。观察安全性指标包括治疗期间生命体征和实验室检查指标及不良反应。对数据行Wilcoxon秩和检验及Bonferroni校正。结果 (1)制备的细胞膜片直径约8 cm，每片面积约49 cm²，含2层或3层KC和Fb。(2)共入选43例患者，其中3例脱落。完成治疗的患者中，男22例、女18例，年龄1～57岁，烧伤总面积为2%～26%TBSA。(3)治疗5、7、10、14 d，细胞膜片组创面愈合率均明显高于常规治疗组(Z＝4.205、4.258、3.495、2.521，P<0.05或P<0.01)。细胞膜片组创面完全愈合时间为7(6，8)d，明显短于常规治疗组的11(7，14)d(Z＝4.219，P<0.01)。细胞膜片组创面换药总次数为1(1，2)次，明显少于常规治疗组的6(4，7)次(Z＝5.464，P<0.01)。(4)31例患者细胞膜片组创面在首次换药前即已愈合，9例患者细胞膜片组创面首次换药疼痛评分为1(0，1)分；40例患者常规治疗组创面首次换药疼痛评分为2(1，3)分。40例患者2组创面完全愈合前均未见有明显感染发生。试验结束后，9例患者完成随访，其中6例患者细胞膜片组创面与常规治疗组创面均未见瘢痕形成，细胞膜片组创面颜色与正常肤色一致，仅见常规治疗组创面少量色素沉积；3例患者细胞膜片组创面仅有色素沉积，而常规治疗组创面瘢痕形成明显。(5)所有患者治疗期间体温、血压、心率、呼吸频率等各项生命体征指标及实验室检查指标异常波动主要随烧伤病程演进及创面愈合自行缓解，未见明显与治疗相关的不良反应与异常表现。结论含异体KC和Fb的细胞膜片可减少Ⅱ度烧伤创面换药次数、加速创面上皮化、缩短愈合时间、减轻换药疼痛；由于其加速创面上皮化进程，可能有利于减轻创面愈合后的瘢痕增生；临床应用简便、安全、有效。

双层人工真皮复合自体皮移植修复骨质和/或肌腱外露创面的临床疗效

李敏雄, 马军, 郑紫君, 牛利斌, 杨磊

2020, 36(3): 179-186. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20191119-00437

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摘要:
目的探讨联用双层人工真皮和自体皮移植修复骨质和/或肌腱外露创面的临床疗效。方法回顾性分析2014年5月—2018年12月南方医科大学南方医院收治的25例各类原因致骨质和/或肌腱外露的创面患者病历资料，患者中男21例、女4例，年龄3～79岁，单纯骨质外露7例、单纯肌腱外露13例、合并骨质与肌腱外露5例。创面总面积为78.0(53.4，103.2)cm²，骨质外露宽度、肌腱外露宽度分别为3.2(3.0，3.6)cm和2.0(1.7，2.4)cm。所有创面彻底清创后Ⅰ期植入双层人工真皮，待2～3周人工真皮血管化后Ⅱ期移植自体薄中厚皮片或刃厚皮片修复创面。观察记录患者人工真皮血管化情况及血管化时间、是否产生血肿，自体皮移植术后7 d皮片成活率、是否重复植皮，创面完全愈合时间，以及患者出院后≥3个月的随访情况。结果 24例患者首次移植人工真皮后完成血管化，血管化时间为11～21(16±4)d，且移植的人工真皮均未产生血肿；1例患者移植的人工真皮血管化失败后，改用负压引流及单纯植皮处理，创面愈合后患者出院。自体皮移植术后7 d，皮片成活率为92.2%～100.0%[(99.3±1.3)%]，余下创面后期自愈或通过换药处理愈合，未重复植皮。创面完全愈合时间为自体皮移植术后7～19(11.9±2.8)d。患者出院后获3～60个月随访，除植皮区部分有色素沉着外，植皮存活良好、柔软、未出现反复破溃，无明显瘢痕增生挛缩畸形。结论双层人工真皮复合自体皮移植修复骨质和/或肌腱外露创面疗效较佳，为该类创面提供了一种修复策略。

外源性肿瘤坏死因子α对三维环境下小鼠间充质干细胞向汗腺细胞分化的影响及机制

朱冬振, 王一惠, 王睿, 付小兵

2020, 36(3): 187-194. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200105-00005

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摘要:
目的探讨外源性肿瘤坏死因子α(TNF－α)对三维环境下小鼠间充质干细胞向汗腺细胞分化的影响及其分子机制。方法 (1)取5只6～8周龄雌性C57BL/6小鼠，用烫伤仪在每只小鼠背部制成1个1 cm²深Ⅱ～Ⅲ度烫伤创面。伤后1 d，取创面全层皮肤组织，采用酶联免疫吸附测定法检测组织中TNF－α浓度。(2)将0.9 g明胶和0.3 g海藻酸钠混匀后溶于30 mL磷酸盐缓冲液中制成水凝胶，取10只1 d龄雌雄不明C57BL/6小鼠足底全层皮肤研磨成真皮匀浆，从10只7 d龄雌雄不明C57BL/6小鼠股骨和胫骨中分离培养间充质干细胞。混合8 mL预热水凝胶、1 mL小鼠足部真皮匀浆、1 mL第2或3代终浓度为1.5×10⁵个/mL间充质干细胞悬液，利用三维生物打印机在培养皿中打印出纵横交错的圆柱块共12块。打印块用25 g/L氯化钙溶液交联10 min，加入间充质干细胞培养基常规培养12 h后，按随机数字表法分为空白对照组和TNF－α处理组，每组6皿、6块。2组打印块均更换新鲜的汗腺诱导培养基培养，TNF－α处理组培养基中另加入终质量浓度为20 ng/mL的TNF－α。培养6 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测各组2皿打印块中间充质干细胞的多能性标志物Nanog mRNA的表达，采用蛋白质印迹法检测各组1皿打印块中间充质干细胞的Nanog蛋白表达，样本数均为3。培养14 d，采用实时荧光定量反转录PCR法检测各组2皿打印块中间充质干细胞的汗腺细胞标志物细胞角蛋白14(CK14)、CK18、钠钾ATP酶蛋白a1(ATP1a1)和水通道蛋白5(AQP5)mRNA表达，样本数为3；采用免疫荧光染色检测各组1皿打印块中间充质干细胞CK14、CK18、ATP1a1和AQP5蛋白表达分布。对数据行独立样本t检验。结果 (1)伤后1 d，小鼠烫伤创面组织中TNF－α质量浓度为(19±3)ng/mL。(2)培养6 h，TNF－α处理组打印块中间充质干细胞Nanog mRNA和蛋白表达量分别为0.39±0.04、0.36±0.03，均明显低于空白对照组的1.00±0.05、1.00±0.07(t＝16.51、14.56，P<0.01)。(3)培养14 d，TNF－α处理组打印块中间充质干细胞CK18、CK14、ATP1a1、AQP5 mRNA表达量分别为0.38±0.03、0.42±0.11、0.23±0.06、0.25±0.03，明显少于空白对照组的1.00±0.03、1.00±0.05、1.00±0.05、1.00±0.07(t＝25.31、8.31、17.07、17.06，P<0.01)。(4)培养14 d，空白对照组打印块中间充质干细胞CK18、CK14、ATP1a1和AQP5蛋白均广泛分布于细胞质，而TNF－α处理组打印块中间充质干细胞CK18、CK14、ATP1a1和AQP5蛋白在细胞质的分布较空白对照组明显减少。结论外源性TNF－α抑制三维环境下小鼠间充质干细胞向汗腺细胞定向分化，这可能与TNF－α抑制Nanog mRNA和蛋白水平的表达从而使间充质干细胞多向分化潜能下调有关。

经外源性血管内皮生长因子处理的大鼠表皮干细胞对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响及机制

施彦, 涂龙翔, 邓琴, 张亚萍, 胡洋红, 刘德伍

2020, 36(3): 195-203. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20191125-00441

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摘要:
目的探讨经外源性血管内皮生长因子(VEGF)处理的大鼠表皮干细胞(ESC)对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响及机制。方法从1只3个月龄雌性SD大鼠躯干皮肤分离获得ESC，取第3代对数生长期细胞进行实验(1)～(3)。(1)取细胞，采用角质形成细胞专用无血清培养基(K-SFM)常规培养(常规培养条件下同)，于倒置光学显微镜下观察培养3、5 d细胞形态。(2)取细胞常规培养24 h，流式细胞仪检测细胞表面标志物CD44、CD45、CD11b和CD11c的表达，样本数为3。(3)取4个批次细胞，各批次细胞均采用随机数字表法分为空白对照组和VEGF组。空白对照组细胞常规培养，VEGF组细胞用含终质量浓度为10 ng/mL VEGF的K-SFM培养。1个批次细胞培养10 d，采用蛋白质印迹法检测细胞角蛋白19(CK19)、CK10蛋白表达；1个批次细胞培养0(即刻)、2、4、6、8、10 d，分别取细胞采用实时荧光定量反转录PCR法检测Nanog mRNA表达；1个批次细胞培养2、4、6、8、10 d，分别取细胞采用细胞计数试剂盒8测定吸光度值；1个批次细胞培养10 d，光学显微镜下观察计数>50个细胞的克隆数，计算细胞克隆形成率。各批次细胞各时间点样本数均为3。(4)选取36只3个月龄雌雄不限SD大鼠，用100 ℃铁质圆片在每只大鼠背部两侧压迫10 s制作2个直径为10 mm的深Ⅱ度烫伤(下称烧伤)创面。按随机数字表法将致伤大鼠分为VEGF＋ESC组、单纯ESC组及空白对照组，每组12只大鼠、24个创面。伤后0(即刻)～2 d，3组大鼠每个创面均每天一次性注射20 μL磷酸盐缓冲液(PBS)，其中VEGF＋ESC组PBS中含0.8×10⁶个/mL经10 ng/mL VEGF处理10 d的ESC、单纯ESC组PBS中含0.8×10⁶个/mL未经任何处理的ESC、空白对照组PBS中不含任何其他物质。于首次注射后(下称注射)0(即刻)、3、7、14 d，先按随机数字表法于每组分别取3只大鼠观察并记录创面愈合情况，计算注射3、7、14 d创面愈合率；随后处死各时间点大鼠切取创面组织行苏木精-伊红染色，行组织学观察。对数据行独立样本t检验、析因设计方差分析、LSD检验、Bonferroni校正。结果 (1)培养3 d细胞呈集群分布，细胞集群生长缓慢；培养5 d集群大而圆，集群内细胞主要为细胞核大而圆、胞质少的细胞，符合ESC形态特征。(2)细胞表面CD44阳性表达率为(94.3±1.2)%，CD45、CD11b、CD11c呈阴性表达。细胞鉴定为ESC。(3)培养10 d，与空白对照组比较，VEGF组细胞CK19蛋白表达水平明显升高(t＝3.756，P<0.05)，CK10蛋白表达水平显著降低(t＝3.149，P<0.05)。与空白对照组比较，VEGF组细胞培养0、2 d Nanog mRNA表达量和培养2、4 d吸光度值无明显变化(t＝0.58、0.77，0.53、3.02，P>0.05)，培养4、6、8、10 d Nanog mRNA表达量和培养6、8、10 d吸光度值均明显升高(t＝6.34、5.00、5.58、4.61，5.65、10.78、15.51，P<0.01)。培养10 d，VEGF组细胞克隆形成率为(56.4±1.3)%，显著高于空白对照组的(31.5±1.3)%(t＝13.96，P<0.01)。(4)注射0 d，3组大鼠创面均可见深度达真皮浅层的烧伤创面。注射3 d，VEGF＋ESC组大鼠创缘正常皮肤组织轻微收缩，早于其余2组；注射7 d，VEGF＋ESC组大鼠新生表皮已覆盖大部分创面，单纯ESC组大鼠创周可见部分上皮爬行，空白对照组大鼠创面未见明显上皮化现象；注射14 d，VEGF＋ESC组大鼠创面基本愈合，单纯ESC组大鼠尚余少部分创面未愈合，空白对照组大鼠尚余大部分创面未愈合。3组大鼠注射3 d创面愈合率相近(P>0.05)；单纯ESC组大鼠注射7、14 d创面愈合率分别为(26.0±2.0)%、(64.4±4.7)%，明显高于空白对照组的(12.4±1.1)%、(29.1±3.3)%(P<0.01)，2组均明显低于VEGF＋ESC组的(41.0±2.4)%、(91.3±3.5)%(P<0.01)。注射3 d，VEGF＋ESC组大鼠创面可见大量炎性细胞浸润，早于其余2组；注射7 d，VEGF＋ESC组大鼠创面可见大量内皮细胞，单纯ESC组大鼠创面可见部分内皮细胞增殖，空白对照组大鼠创面可见大量炎性细胞浸润；注射14 d，VEGF＋ESC组大鼠创面新生表皮细胞基本覆盖创面，单纯ESC组大鼠创面新生表皮细胞覆盖大部分创面，空白对照组大鼠创面基底可见大量内皮细胞且新生表皮细胞覆盖部分创面。结论经外源性VEGF处理的大鼠ESC可促进深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合，这可能与VEGF促进ESC增殖并降低其分化水平从而维持细胞干性有关。

乙酰化葡甘露聚糖纤维膜的制备和生物活性的研究及其在创面敷料中的应用

陈甜胜(译者), 肖仕初(审校者)

2020, 36(3): 186-186. doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2020.03.102

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摘要:

通过功能性可注射热敏壳聚糖水凝胶包裹的人脐带间充质干细胞促进皮肤创面愈合

姜耀男(译者), 肖仕初(审校者)

2020, 36(3): 186-186. doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2020.03.101

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严重烧伤患者早期外周血中性粒细胞趋化功能变化及影响因素

戚欣欣, 杨云稀, 孙炳伟

2020, 36(3): 204-209. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190801-00329

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目的观察严重烧伤患者早期外周血中性粒细胞趋化功能变化及影响因素。方法将2019年1—5月南京医科大学附属苏州医院收治的符合入选标准的7例伤后6 h内入院的严重烧伤患者纳入烧伤组[男4例、女3例，年龄(36±10)岁]，同期招募该单位体检中心体检结果正常的7名健康志愿者纳入健康对照组[男5名、女2名，年龄为(35±8)岁]，进行前瞻性对照研究。(1)烧伤组患者于入院后1、3、5 d各抽取2 mL静脉血，健康对照组志愿者取2 mL静脉血，常规检测白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞计数及血清降钙素原、C反应蛋白水平。(2)同前取烧伤患者和健康志愿者静脉血，酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。(3)同前取烧伤患者和健康志愿者静脉血，Ficoll密度梯度离心法分离外周血中性粒细胞，琼脂糖趋化实验检测细胞趋化距离，流式细胞仪仅检测烧伤组患者入院后3 d及健康对照组志愿者趋化因子受体CXCR1、CXCR2阳性表达率。对数据行重复测量方差分析、t检验及Bonferroni校正。结果 (1)烧伤组患者入院后1、3、5 d血小板计数与健康对照组志愿者相近(t＝0.55、0.44、0.12，P>0.05)。烧伤组患者入院后1、3、5 d中性粒细胞计数、白细胞计数及血清降钙素原、C反应蛋白表达水平均明显高于健康对照组志愿者(t＝196.96、273.31、45.22，3.46、4.18、5.55，4.36、5.26、11.13，64.94、89.97、84.31, P<0.01)。(2)烧伤组患者入院后1、3、5 d IL-6水平明显高于健康对照组志愿者(t＝187.43、213.54、195.74，P<0.01)，IL-10水平明显高于健康对照组志愿者(t＝21.47、11.13、6.23，P<0.01)，TNF-α水平明显高于健康对照组志愿者(t＝5.27、7.89、15.58，P<0.01)。(3)烧伤组患者入院后1、3、5 d中性粒细胞趋化距离分别为(1 479±102)、(1 395±82)、(1 017±91)μm，明显短于健康对照组志愿者的(1 902±120)μm，t＝7.11、9.23、15.55，P<0.01。(4)烧伤组患者入院后3 d中性粒细胞CXCR1、CXCR2阳性表达率分别为(48.3±1.6)%、(79.0±1.8)%，明显低于健康对照组志愿者的(95.4±4.5)%、(97.8±2.1)%，t＝27.13、23.10，P<0.01。结论严重烧伤患者早期外周血中性粒细胞趋化功能障碍，这可能与CXCR1、CXCR2降低有关。

浓缩生长因子联合血浆蛋白凝胶治疗面部凹陷瘢痕的临床效果

孙佳琳, 王军杰, 崔正军, 孟庆楠, 刘欣健, 王旭, 余祖改

2020, 36(3): 210-218. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190930-00389

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摘要:
目的探讨浓缩生长因子(CGF)联合血浆蛋白凝胶(PAG)治疗面部凹陷瘢痕的临床效果。方法 2018年1月—2019年6月，郑州大学第一附属医院收治14例、河南省直第三人民医院收治10例符合入选标准的面部凹陷瘢痕患者，以病例对照研究的方法回顾性分析其临床资料。按采取的治疗方法分组，8例患者纳入单纯CGF组，其中男4例、女4例，年龄28.50(25.50，31.50)岁；8例患者纳入单纯PAG组，其中男3例、女5例，年龄32.00(28.50，35.00)岁；8例患者纳入CGF＋PAG组，其中男5例、女3例，年龄33.50(29.00，35.75)岁。单纯CGF组、单纯PAG组、CGF＋PAG组患者凹陷瘢痕皮下分别单点或多点注射适量自体血液制备的CGF、PAG、CGF＋PAG(比例为1.0∶1.0～1.0∶1.5)，以填满凹陷为度，4周1次，共3次。首次治疗前(下称治疗前)及末次治疗后(下称治疗后)3个月，采用Goodman & Baron痤疮瘢痕分级系统进行瘢痕分级并计算差值，采用焦虑自评量表进行焦虑评分并计算差值；首次治疗结束即刻，采用视觉模拟评分法进行疼痛评分；治疗后1、2、3个月，进行患者瘢痕治疗满意度评分，采用全球审美改善量表进行瘢痕改善程度评分。观察患者治疗后是否有不良反应。对数据行Fisher确切概率法检验、Kruskal－Wallis H检验、Mann－Whitney U检验、Bonferroni校正、Wilcoxon符号秩和检验。结果 (1)治疗前，3组患者瘢痕分级均为4.00(4.00，4.00)级(χ²<0.001，P>0.05)。治疗后3个月，与单纯CGF组的2.00(1.25，2.00)级比较，单纯PAG组、CGF＋PAG组患者瘢痕分级没有明显变化[3.00(2.00，3.00)、1.00(1.00，1.00)级，Z＝2.199、2.003，P>0.05]；CGF＋PAG组患者瘢痕分级明显低于单纯PAG组(Z＝3.229，P<0.01)。与治疗前比较，单纯CGF组、单纯PAG组、CGF＋PAG组患者治疗后3个月瘢痕分级均明显降低(Z＝2.588、2.598、2.640，P<0.05或P<0.01)。CGF＋PAG组患者治疗前后瘢痕分级差值明显高于单纯PAG组(Z＝3.229，P<0.01)。(2)治疗前、治疗后3个月，3组患者焦虑评分均相近(χ²＝2.551、2.768，P>0.05)。与治疗前比较，单纯CGF组、单纯PAG组、CGF＋PAG组患者治疗后3个月焦虑评分均明显降低(Z＝2.395、2.527、2.533，P<0.05)。3组患者治疗前后焦虑评分差值相近(χ²＝1.796，P>0.05)。(3)3组患者首次治疗结束即刻疼痛评分相近(χ²＝0.400，P>0.05)。(4)治疗后1、2个月，3组患者瘢痕治疗满意度评分均相近(χ²＝2.688、5.989，P>0.05)。治疗后3个月，CGF＋PAG组患者瘢痕治疗满意度评分明显高于单纯PAG组(Z＝2.922，P<0.01)。与组内治疗后1个月比较，单纯CGF组、单纯PAG组、CGF＋PAG组患者治疗后2、3个月瘢痕治疗满意度评分均明显升高(Z＝1.121、2.392，2.000、2.828，2.449、2.598，P<0.05或P<0.01)。与组内治疗后2个月比较，单纯CGF组、单纯PAG组、CGF＋PAG组患者治疗后3个月瘢痕治疗满意度评分均明显升高(Z＝2.271、2.000、2.646，P<0.05或P<0.01)。(5)治疗后1个月，3组患者瘢痕改善程度评分相近(χ²＝4.438，P>0.05)。治疗后2个月，单纯CGF组、CGF＋PAG组患者瘢痕改善程度评分分别为2.00(2.00，2.75)、2.00(2.00，2.00)分，均明显高于单纯PAG组的1.00(1.00，1.00)分(Z＝3.303、3.771，P<0.01)。治疗后3个月，CGF＋PAG组患者瘢痕改善程度评分为3.00(3.00，3.00)分，明显高于单纯CGF组的2.00(2.00，2.75)分和单纯PAG组的1.00(1.00，2.00)分(Z＝2.450、3.427，P<0.05或P<0.01)。与组内治疗后1个月比较，单纯CGF组与CGF＋PAG组患者治疗后2、3个月和单纯PAG组患者治疗后3个月瘢痕改善程度评分均明显升高(Z＝2.828、2.828，2.530、2.640，2.121，P<0.05或P<0.01)。与组内治疗后2个月比较，CGF＋PAG组患者治疗后3个月瘢痕改善程度评分明显升高(Z＝2.449，P<0.05)。(6)3组患者注射后进针口均有轻微红肿，无其他不良反应。结论 CGF联合PAG治疗患者面部凹陷瘢痕后，患者瘢痕分级降低、焦虑程度减轻、治疗满意度增加、瘢痕改善程度增加，无明显不良反应，较单一成分注射效果好，值得临床推广。

带阔筋膜股前外侧游离皮瓣修复头部鳞状细胞癌切除后硬脑膜缺损的效果

韩夫, 郑朝, 王洪涛, 官浩, 计鹏, 胡晓龙, 佟琳, 张智, 陈俏华, 冯爱娜, 胡大海

2020, 36(3): 219-223. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190505-00222

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目的评价应用带阔筋膜的股前外侧皮瓣游离移植修复头部鳞状细胞癌切除后硬脑膜缺损的临床疗效。方法 2016年6月—2018年6月，空军军医大学西京医院收治12例头部鳞状细胞癌患者，其中男9例、女3例，年龄35～74岁，均采用带阔筋膜的股前外侧皮瓣游离移植修复肿瘤切除后硬脑膜缺损。本组患者肿瘤切除后头皮软组织缺损面积为12 cm×10 cm～24 cm×21 cm，硬脑膜缺损面积为7 cm×6 cm～16 cm×14 cm；皮瓣面积为14 cm×12 cm～27 cm×24 cm，阔筋膜面积为8 cm×7 cm～17 cm×15 cm。将颞浅动脉及颞中静脉与皮瓣供血血管旋股外侧动脉降支第1肌皮穿支及其伴行静脉分别端端吻合。供瓣区取自体躯干中厚皮移植修复并打包固定。术后观察患者皮瓣和皮片存活情况；定期随访，行头颅磁共振成像，观察颅内肿瘤是否复发和硬脑膜完整性，另观察皮瓣的外形、供瓣区是否遗留明显功能障碍。结果本组患者术后皮瓣和皮片均存活良好。10例患者皮瓣缝合边缘愈合；2例患者皮瓣缝合口局部窦道形成，少量脑脊液外漏，经门诊换药后痊愈。本组患者随访10～36个月，3例患者术后颅内肿瘤复发，均为肿瘤累及硬脑膜矢状窦区患者，再次切除肿瘤；所有患者硬脑膜完整，皮瓣外形较佳，供瓣区切取后未遗留明显功能障碍。结论采用带阔筋膜的股前外侧皮瓣游离移植修复头部鳞状细胞癌切除后硬脑膜缺损是一种有效、可靠的方法，能较好修复因鳞状细胞癌侵犯切除头皮及硬脑膜形成的缺损，并为颅骨重建提供有利条件。

成人真皮成纤维细胞中转化生长因子β ₁转录调控Meox1的机制及对细胞迁移的影响

卫志远, 李海胜, 周俊峄, 韩超, 董惠, 吴玉章, 贺伟峰, 田易, 罗高兴

2020, 36(3): 224-233. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200109-00014

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目的探讨成人真皮成纤维细胞(HDF-a)中转化生长因子β₁(TGF-β₁)对Meox1的转录调控机制及细胞迁移功能的影响。方法 (1)取HDF-a系细胞，用RPMI 1640完全培养基培养(下称常规培养)，将细胞分为TGF-β₁刺激组和空白对照组。TGF-β₁刺激组细胞加入10 μL质量浓度为1 mg/μL的TGF-β₁刺激，空白对照组加入等量磷酸盐缓冲液。培养72 h，取2组部分细胞进行转录组测序，筛选出2组差异表达比值≥2且P<0.01的基因，对差异基因进行功能富集分析与京都基因和基因组百科全书代谢途径分析，记录Meox1每百万转录本(TPM)表达值，样本数为3；取2组部分细胞，采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测Meox1 mRNA表达，样本数为3。(2)取对数生长期HDF-a系细胞(细胞生长期下同)常规培养，分为空质粒组和Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组，分别转染2 μg pcDNA3.1空质粒和各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒，转染6 h后常规培养48 h，实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中Meox1 mRNA的表达，样本数为3。(3)取HDF-a系细胞常规培养，同实验(1)分组处理，常规培养72 h，采用染色质免疫共沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测2组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度，样本数为3。(4)取HDF-a系细胞常规培养，分为阴性干扰组、小干扰RNA(siRNA)-Smad2组、siRNA-Smad3组、siRNA-Smad4组和空质粒组、Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组，分别转染50 μmol/L随机siRNA、siRNA-Smad2、siRNA-Smad3、siRNA-Smad4和2 μg pcDNA3.1空质粒及各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒，转染6 h后常规培养48 h，ChIP-qPCR法检测相应组别细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度，样本数为3。(5)取2个批次HDF-a系细胞常规培养，均分为阴性干扰组、siRNA-Meox1组、空质粒组、Meox1过表达组，分别转染50 μmol/L随机siRNA、siRNA-Meox1和2 μg pcDNA3.1空质粒、搭载Meox1的pcDNA3.1质粒，转染6 h后常规培养24 h，1个批次细胞进行划痕实验，划痕后24 h观察划痕宽度，与划痕后即刻对比划痕愈合宽度；1个批次细胞进行Transwell实验，常规培养24 h，计数迁移细胞，样本数为3。(6)2018年1月—2019年6月，陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院收治3例烧伤后8～12个月增生性瘢痕患者(男2例、女1例，年龄35～56岁)，取其术中切除的瘢痕组织和瘢痕边缘附带正常皮肤组织，行免疫组织化学染色，观察Meox1蛋白表达分布。对数据行单因素方差分析、独立样本t检验。结果 (1)培养72 h，2组细胞差异表达明显的基因共843个，涉及组织修复、细胞迁移、炎性细胞趋化诱导过程等功能以及肿瘤坏死因子、白细胞介素17、细胞外基质受体等潜在的信号通路；空白对照组细胞测序结果的Meox1 TPM表达值为45.9±1.9，显著低于TGF-β₁刺激组的163.1±29.5(t＝6.88，P<0.01)。培养72 h，空白对照组细胞Meox1 mRNA表达量为1.00±0.21，显著低于TGF-β₁刺激组的11.00±3.61(t＝4.79，P<0.01)。(2)培养48 h，Smad2过表达组、Smad3过表达组和Smad4过表达组细胞中Meox1 mRNA表达量分别为198.70±11.02、35.47±4.30、20.27±2.50，均显著高于空质粒组的1.03±0.19(t＝31.07、13.80、13.12，P<0.01)。(3)培养72 h，TGF-β₁刺激组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度均显著高于空白对照组(t＝12.99、41.47、29.10，P<0.01)。(4)培养48 h，阴性干扰组细胞中Smad2蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.200 000±0.030 000)%，显著高于siRNA-Smad2组的(0.000 770±0.000 013)%(t＝11.67，P<0.01)；空质粒组细胞中Smad2蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.200 000±0.040 000)%，显著低于Smad2过表达组的(0.700 000±0.090 000)%(t＝8.85，P<0.01)。阴性干扰组细胞中Smad3蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.500 0±0.041 3)%，显著高于siRNA-Smad3组的(0.006 0±0.001 3)%(t＝17.79，P<0.01)；空质粒组细胞中Smad3蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.470 0±0.080 0)%，显著低于Smad3过表达组的(1.100 0±0.070 0)%(t＝9.93，P<0.01)。阴性干扰组细胞中Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度与siRNA-Smad4组相近(t＝2.11，P>0.05)，空质粒组细胞中Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度与Smad4过表达组相近(t＝0.60，P>0.05)。(5)划痕后24 h，siRNA-Meox1组细胞划痕愈合宽度较阴性干扰组窄，Meox1过表达组细胞划痕愈合宽度较空质粒组宽。培养24 h，阴性干扰组迁移细胞数显著多于siRNA-Meox1组(t＝9.12，P<0.01)，空质粒组迁移细胞数显著少于Meox1过表达组(t＝8.99，P<0.01)。(6)烧伤后增生性瘢痕患者瘢痕组织中Meox1蛋白表达明显高于正常皮肤组织。结论在HDF-a系细胞中，TGF-β₁通过Smad2/3转录调控Meox1表达，进而促进细胞迁移。

白细胞介素17修饰小鼠骨髓间充质干细胞对异体小鼠皮肤移植排斥反应的影响及机制

马腾霄, 许颖溦, 姜笃银

2020, 36(3): 234-243. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190510-00232

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目的探讨白细胞介素17(IL－17)修饰的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对异体小鼠皮肤移植的影响及机制。方法 (1)取5只BALB/c小鼠(均为雌性，4～8周龄，性别、鼠龄下同)，处死后取股骨、胫骨和肱骨，采用全骨髓密度梯度离心联合贴壁分离法分离纯化培养BMSC，取第3代细胞行形态学观察，该代细胞经成骨、成脂诱导分化鉴定。第4代细胞经干细胞表面标志物鉴定。取第3～6代BMSC，经终质量浓度50 ng/mL小鼠重组IL－17预处理5 d后，行形态学观察。取IL－17预处理的BMSC和未经IL－17预处理BMSC标记碳花青荧光染料(CM－Dil)，行形态学观察并计算标记率。(2)取45只C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组13只、单纯BMSC组16只、BMSC＋IL－17组16只。在小鼠皮肤移植术前1 d，单纯BMSC组13只小鼠经尾静脉注射5×10⁶个/mL未经CM－Dil标记的BMSC 0.1 mL，另3只小鼠经尾静脉注射5×10⁶个/mL CM－Dil标记的BMSC 0.1 mL；BMSC＋IL－17组13只小鼠经尾静脉注射5×10⁶个/mL未经CM－Dil标记的IL－17预处理的BMSC 0.1 mL，另3只小鼠经尾静脉注射5×10⁶个/mL CM－Dil标记的IL－17预处理的BMSC 0.1 mL；PBS对照组13只小鼠经尾静脉注射0.1 mL PBS。取45只BALB/c小鼠作供体，将前述3组处理后的45只C57BL/6J小鼠作为受体，建立背－背全厚皮移植模型。于移植术后第2天，再次对3组小鼠注射与移植术前1 d一样的等量相应细胞或PBS。于移植术后第7天，分别取单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组中注射CM－Dil标记的BMSC和CM－Dil标记的IL－17预处理BMSC的3只小鼠，脱颈处死后采用荧光显微镜观察BMSC的CM－Dil示踪并计数。于移植术后第6天拆除敷料后，从单纯BMSC组注射未经CM－Dil标记的BMSC的13只小鼠和BMSC＋IL－17组注射未经CM－Dil标记的IL－17预处理BMSC的13只小鼠及PBS对照组13只小鼠中选取7只小鼠，记录移植皮片的存活时间。于移植术后第8天，从3组剩余的6只小鼠中分别取3只小鼠进行移植皮片的大体观察，酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中γ干扰素、IL－10、转化生长因子β(TGF－β)的水平，流式细胞仪检测脾脏CD4^＋CD25^＋叉头翼状螺旋转录因子p3(Foxp3)^＋调节性T细胞(Treg)比例，行苏木精－伊红染色观察移植皮片的组织形态。于移植术后第14天，取3组剩余3只小鼠同前行组织形态观察。对数据行独立样本t检验、单因素方差分析、LSD检验。结果 (1)培养5 d，经IL－17预处理的BMSC与未处理的BMSC形态和大小并无明显差别。(2)CM－Dil标记后，经IL－17预处理的BMSC与未处理的BMSC生长状态均较良好，标记率几乎可达100%。(3)移植术后第7天，单纯BMSC组小鼠皮片及邻近皮下组织CM－Dil标记阳性的BMSC数量为每100倍视野下(6.2±2.6)个，明显少于BMSC＋IL－17组CM－Dil标记阳性的IL－17预处理BMSC的每100倍视野下(15.0±5.3)个(t＝－2.962，P<0.05)。(4)单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片的存活时间分别为(13.3±1.2)、(17.0±1.5)d，明显长于PBS对照组的(8.7±0.8)d(P<0.01)，而BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片的存活时间明显长于单纯BMSC组(P<0.01)。(5)移植术后第8天，PBS对照组小鼠移植皮片大部分发黑变硬且结痂坏死，单纯BMSC组小鼠移植皮片大部分存活良好，BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片均存活良好。(6)移植术后第8天，与PBS对照组相比，单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组小鼠的血清中IL－10和TGF－β含量明显升高(P<0.01)，γ干扰素含量明显降低(P<0.01)；与单纯BMSC组相比，BMSC＋IL－17组小鼠的血清中IL－10和TGF－β含量明显升高(P<0.01)，γ干扰素含量明显降低(P<0.01)。(7)移植术后第8天，单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg比例明显高于PBS对照组(P<0.01)，BMSC＋IL－17组小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg比例明显高于单纯BMSC组(P<0.01)。(8)移植术后第8天，PBS对照组小鼠移植皮片可见大量炎性细胞浸润，表皮、真皮坏死；单纯BMSC组小鼠移植皮片可见局灶性的炎性细胞浸润，仅有轻微的表皮变性；BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片皮肤附属器存活完好，同时有血管形成。移植术后第14天，单纯BMSC组小鼠移植皮片可见广泛的炎性细胞浸润，并有较重的表皮变性和局灶性坏死；BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片可见局灶性的炎性细胞浸润和轻微表皮变性；PBS对照组小鼠移植皮片已完全坏死。结论 IL－17可通过提高小鼠BMSC诱导免疫耐受的能力和增强BMSC的归巢能力，最终起到减轻异体皮片移植后免疫排斥反应，延长小鼠移植皮片存活时间的作用。

人工智能技术辅助烧伤深度诊断的研究进展

贲驰, 李海航, 刘彤, 王泽京, 程大胜, 朱世辉

2020, 36(3): 244-246. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190403-00162

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摘要:
烧伤深度的早期精确诊断对决定相应的临床干预手段和判断烧伤患者预后质量具有重要意义。然而目前烧伤深度的诊断仍主要依靠临床医师的主观经验性判断，准确率低，尤其对于深Ⅱ度烧伤创面，早期诊断误差较大。近年来，人工智能技术发展迅速，深度学习算法结合图像分析技术能够更好地识别、分析医学图像信息。本文将对人工智能技术在烧伤深度诊断方面的研究进展进行综述。

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