摘要:
目的 了解缺氧对钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）表达的影响及c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在其中的作用。方法 将人血管内皮细胞株EA．hy926进行缺氧处理3h后继续常规培养0、12、24、48、72h，同时设常氧培养对照。采用蛋白质印迹法检测CASK的表达。构建CASK启动子区荧光素酶报告基因质粒。用其转染细胞后，于常氧及缺氧培养1、3、6、12h裂解细胞提取总蛋白，检测报告基因萤火虫荧光素酶及内参照海肾素荧光素酶活性，并用蛋白质印迹法检测JNK磷酸化情况。在培养的细胞中分别加入不同剂量（0、10、100nmo/L，1、10μmol／L）的JNK抑制剂SP600125预处理1h后再缺氧培养3h，观察其对CASK表达的影响。结果缺氧处理后常规培养0～72h，细胞CASK持续保持高表达，并明显高于常氧组。随着缺氧时间延长荧光素酶相对活性普遍增加，均高于常氧组（0．010±0．003，P〈0．01），且缺氧12h达峰值（0．192±0．023）。JNK的磷酸化随缺氧时间延长逐渐增强。加入SP600125后，CASK的表达显著降低，并呈剂量一效应依赖性，其浓度为10μmol／L时，抑制效率达高峰。结论 缺氧上调血管内皮细胞CASK的表达部分依赖于JNK信号通路活化。
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