摘要: 目的观察胰岛素对体外培养兔骨骼肌肌管蛋白降解的调节作用。方法无菌分离幼兔下肢骨骼肌肌肉，采用组织块法分离、培养成肌细胞，待其融合形成肌管，采用L-[3，5-^3H]．酪氨酸标记肌管内蛋白后，随机分为对照组（用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）、胰岛素组（用含100nmoL／L胰岛素＋体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）、地塞米松组（用含100nmoL／L地塞米松＋体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）和胰岛素＋地塞米松组（用含100nmol／L胰岛素＋100nmol／L地塞米松＋体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养），每组含24孔肌管。培养24h后，应用液体闪烁计数仪测定培养液和肌管内L-[3，5-^3H]．酪氨酸的含量，计算肌管内蛋白的降解率。RNA印迹法测定肌管内泛素-蛋白酶体C2亚基mRNA的表达水平，以其与内参照甘油醛-3-磷酸脱氢酶的灰度值之比表示。结果肌管内蛋白的降解比：地塞米松组为0．50±0．03，明显高于对照组（0．38±0．04，P〈0．01）；胰岛素组为0．35±0．03，明显低于对照组（P〈0．05）；胰岛素＋地塞米松组为0．41±0．03，明显低于地塞米松组（P〈0．01），但仍高于对照组（P〈0．05）。肌管内泛素-蛋白酶体C2亚基的mRNA表达水平：与对照组（泛素2．4kb条带为0．82±0．15、1．2kb条带为0．60±0．10，C2亚基为0．75±0．16）比较，地塞米松组（泛素2．4kb条带为2．15±0．23、1．2kb条带为1．50±0．14，C2亚基为1．50±0．13）明显升高（P〈0．01）；胰岛素＋地塞米松组（泛素2．4kb条带为1．25±0．17、1．2kb条带为0．85±0．09，C2亚基为0．90±0．15）明显低于地塞米松组（P〈0．01）；胰岛素组（泛素2．4kb条带为0．85±0．07、1．2kb条带为0．65±0．12，C2亚基为0．76±0．09）与对照组相近（P〉0．05）。结论胰岛素对兔骨骼肌肌管内泛素．蛋白酶体途径的活性和蛋白代谢分别有较弱的促进与抑制作用，但能有效拮抗地塞米松诱导的该途径活性的增强和蛋白的高降解，其机制尚有待进一步探讨。