人内皮高表达脂多糖相关因子1强制表达模型的建立及对ECV304细胞增殖的影响

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基金项目:

国家自然科学基金资助项目(302001O1、30371468)

创伤烧伤复合伤国家重点实验室开放课题基金资助项目

Establishment of human endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1 compelling expression model and its effects on the proliferation of ECV304 cells

Institute of Burn Research ,Southwest Hospital,State Key Laboratory of Trauma,Burns and Combined Injury,The Third Military Medieal University,Chongqing 400038 ,P.R. China

摘要: 目的设计和构建新基因内皮高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)诱导表达载体,建立EOLA1强制表达模型,观察其对细胞增殖的影响. 方法逆转录聚合酶链反应扩增EOLA1开放阅读框片段,引入Not Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向亚克隆入可调控真核表达的载体pOPRSVⅠ,测序验证后共转染pOPRSVⅠ- EOLA1和pCMVLacⅠ质粒于ECV304细胞,经潮霉素和G418筛选,获得稳定转染细胞株.对异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导和非诱导的稳定转染细胞株进行计数,绘制细胞生长曲线.结果成功构建了 EOLA1可调控真核表达载体pOPRSVⅠ- EOLA1.诱导后第4天, EOLA1稳定表达的ECV304细胞数量为(44±17)×104个,显著多于未诱导细胞的数量(27±11)×104个(P<0.01). 结论强制高表达EOLA1蛋白具有促进ECV304细胞增殖的作用.
- 基因表达 /
- 转染 /
- 内哎细胞 /
- 内皮高表达脂多糖相关因子l
- Gene expression /
- Transfection /
- Endothelial cells /
- Endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1