摘要:
目的建立人血管内皮生长因子165（VEGF165）基因转染人骨髓间充质干细胞（MSC）的有效方法。方法体外分离培养MSC，设转染组：采用脂质体介导法将pShuttle—CMV／VEGF165质粒转染至MSC，空质粒组：转染pShuttle．CMV载体作对照，脂质体组：转染脂质体作对照，对照组：常规培养。用RT—PCR、酶联免疫吸附测定法和蛋白质印迹法检测MSC mRNA及其蛋白的表达情况，用噻唑蓝法检测MSC对VEGF质粒转染的敏感性。结果转染组、空质粒组、脂质体组和对照组VEGF165基因mRNA表达量分别为0．89±0．03、0．34±0．04、0．40±0．03、0．30±0．03，转染组与后3组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；各组细胞培养上清液中VEGF165蛋白含量依次为（778±35）、（543±24）、（561±28）、（571±23）pg／mL，与后3组比较，转染组差异有统计学意义（P〈0．01），转染后第7天表达至高峰，以后逐渐降低。转染组MSC中VEGF165蛋白表达电泳条带强度明显强于其他3组（P〈0．01），VEGF质粒转染对MSC增殖活性无影响。结论本研究建立了VEGF165基因对MSC的转染方法，能有效表达目的基因及其蛋白。
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