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去甲肾上腺素对小鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响及其机制

孔亚男 金晶 程飚

赵书明, 刘亚明, 刘娜, 等. CT血管造影辅助下逆行股前外侧穿支皮瓣修复膝周或小腿近端皮肤及软组织缺损的临床效果[J]. 中华烧伤杂志, 2021, 37(4): 356-362. DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20200905-00401
引用本文: 孔亚男, 金晶, 程飚. 去甲肾上腺素对小鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响及其机制[J]. 中华烧伤杂志, 2020, 36(12): 1173-1182. Doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200325-00194
Zhao Shuming, Liu Yaming, Liu Na, et al. Clinical effects of retrograde anterolateral thigh perforator flaps assisted with computed tomography angiography in repairing skin and soft tissue defects around the knee or in proximal lower leg[J]. Chin j Burns, 2021, 37(4): 356-362. DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20200905-00401
Citation: Kong Yanan, Jin Jing, Cheng Biao. Effects and mechanism of norepinephrine on the migration of bone marrow mesenchymal stem cells in mice[J]. Chin j Burns, 2020, 36(12): 1173-1182. Doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200325-00194

去甲肾上腺素对小鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响及其机制

doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200325-00194
基金项目: 

广东省科技计划 (2014B020212010、2015B020233012)

国家自然科学基金面上项目 (81171812、81272105、81671924)

国家重点研发计划 (2017YFC1103301)

军事医学创新工程专项 (18CXZ029)

广州市健康医疗协同创新重大专项 (201508020253)

Effects and mechanism of norepinephrine on the migration of bone marrow mesenchymal stem cells in mice

  • 摘要: 目的 探讨交感神经递质去甲肾上腺素(NE)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移的影响及其机制。 方法 (1)取20只3周龄雄性C57BL/6小鼠,处死后取出股骨和胫骨,分离培养BMSC并鉴定。取第2代或3代细胞,分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、1 μmol/L NE组、10 μmol/L NE组及100 μmol/L NE组,每组8孔。1 μmol/L NE组、10 μmol/L NE组及100 μmol/L NE组细胞分别在含体积分数1%胎牛血清的低糖DMEM培养基(以下简称低血清培养基)内分别加入终物质的量浓度为1、10、100 μmol/L的NE培养,PBS组细胞在低血清培养基内加入等体积的PBS培养。在刺激前(0 d)及刺激1、3、5 d,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖活性(以吸光度值表示)。(2)细胞划痕试验1中,取细胞分为PBS组和单纯NE组,行划痕试验后,单纯NE组细胞采用低血清培养基+终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养,PBS组细胞采用低血清培养基+等体积PBS培养。细胞划痕试验2中,取细胞分为PBS组、普萘洛尔+NE组、酚妥拉明+NE组,行划痕试验后,普萘洛尔+NE组细胞每天采用低血清培养基+终物质的量浓度为1 μmol/L的普萘洛尔、酚妥拉明+NE组细胞每天采用低血清培养基+终物质的量浓度为10 μmol/L的酚妥拉明预处理30 min后,均再采用低血清培养基+终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养;PBS组采用低血清培养基+等体积PBS培养。细胞划痕试验3中,取细胞分为单纯NE组、单纯(2E,6E)-2,6-二(4-吡啶基亚甲基)环己酮(SC-66)组、SC-66+NE组,行划痕试验后,单纯NE组采用低血清培养基+终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养;单纯SC-66组细胞每天采用终物质的量浓度为30 mmol/L的SC-66预处理30 min后,再采用低血清培养基培养;单纯SC-66+NE组每天采用终物质的量浓度为30 mmol/L的SC-66预处理30 min后,再采用低血清培养基+终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养。以上3个细胞划痕试验,每组样本数均为6,均计算划痕后24、48、72 h的划痕愈合率。(3)取细胞分为PBS组、单纯NE组、普萘洛尔+NE组、酚妥拉明+NE组,每组3孔,PBS组、单纯NE组下室处理分别同细胞划痕试验1相同组,普萘洛尔+NE组和酚妥拉明+NE组下室处理分别同细胞划痕试验2相同组,行Transwell实验。常规培养24 h后,计数迁移细胞。(4)取细胞分为PBS组、单纯NE组、普萘洛尔+NE组、酚妥拉明+NE组,每组2皿,PBS组、单纯NE组细胞处理分别同细胞划痕试验1相同组,普萘洛尔+NE组和酚妥拉明+NE组细胞处理分别同细胞划痕试验2相同组。常规培养24 h后,采用蛋白质印迹法检测细胞蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验、LSD-t检验、Bonferroni校正。 结果 (1)刺激1 d,100 μmol/L NE组细胞吸光度值明显低于PBS组(t=2.986,P<0.05);刺激5 d,10 μmol/L NE组细胞吸光度值明显高于PBS组(t=3.547,P<0.01)。(2)细胞划痕试验1中,划痕后24、48、72 h,单纯NE组细胞划痕愈合率分别为(34.4±3.4)%、(52.5±4.7)%、(70.0±3.8)%,明显低于PBS组的(44.1±4.2)%、(80.0±3.6)%、(95.9±2.2)%(t=19.320、128.319、221.575,P<0.01)。细胞划痕试验2中,划痕后24、48、72 h,普萘洛尔+NE组细胞划痕愈合率均明显低于PBS组(t=4.073、9.618、15.272,P<0.01)。细胞划痕试验3中,划痕后72 h,单纯NE组细胞划痕愈合率明显低于单纯SC-66组(t=8.862,P<0.01);划痕后24、48、72 h,SC-66+NE组细胞划痕愈合率均明显低于单纯SC-66组(t=3.862、4.290、10.357,P<0.01)。(3)Transwell实验显示,培养24 h,单纯NE组、普萘洛尔+NE组及酚妥拉明+NE组细胞迁移数量均明显少于PBS组(t=11.895、10.196、3.222,P<0.01)。(4)培养24 h后,与PBS组比较,单纯NE组、普萘洛尔+NE组细胞Akt磷酸化水平明显升高(t=8.186、5.996,P<0.01)。 结论 NE可抑制小鼠BMSC迁移,Akt信号通路参与了此调控过程。

     

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出版历程
  • 收稿日期:  2020-03-25
  • 网络出版日期:  2021-10-28
  • 刊出日期:  2020-12-20

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