Establishment of an evaluation index system of home care quality for caregivers of children aged 3 years and below with burns
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摘要:
目的 构建≤3岁烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系。 方法 采用定性研究和定量研究相结合的方法，遵循指标体系构建的基本原则。2022年1—2月，通过分析文献，对宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科6名31~51岁工作10年以上的女护士和15名（女11名、男4名）28~54岁接受过护理人员的专业性培训的住院烧伤患儿照护者进行半结构式访谈，以马斯洛需要层次论为理论指导，初步拟定≤3岁烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系。2022年3—6月，运用德尔菲法对符合入选标准的在宁夏回族自治区内的综合医院、专科医院和高校就职的15名相关领域专家开展函询（统计其一般资料），确立评价指标体系并采用层次分析法确定各级指标权重。计算函询表有效回收比，判断专家积极程度；计算所有指标的权威系数均值，判断专家权威程度；计算所有指标的重要性赋值均值与满分比均值，判断专家意见集中程度；计算所有指标的肯德尔和谐系数均值和变异系数均值，判断专家意见协调程度。对各轮函询中一级指标和总二级指标及总三级指标的肯德尔和谐系数行 χ 2检验。 结果 初步拟定的≤3岁烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系包含5个一级指标、13个二级指标、55个三级指标。15名专家以女性居多，年龄32~56岁，全部为本科及以上学历、中级及以上职称，工作年限14~31年。第1、2轮函询表有效回收比分别为1（15/15）、0.93（14/15）。第1、2轮函询所有指标的权威系数均值分别为0.87、0.90。所有指标重要性赋值均值、满分比均值在第1轮函询中分别为4.25、0.68，在第2轮函询中分别为4.39、0.70。第1、2轮函询中所有指标的肯德尔和谐系数均值分别为0.50和0.62，所有指标的变异系数均值分别为0.15和0.14。第1、2轮函询中5个一级指标（生理需要、安全需要、爱与归属的需要、尊重的需要、自我实现的需要）和总二级指标及总三级指标的肯德尔和谐系数检验，结果均具有统计学意义（ χ 2值分别为22.18、20.36、23.42、25.81、21.44、124.73、524.05及24.27、19.85、22.39、27.52、20.83、102.38、503.27， P<0.05）。最终确立的≤3岁烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系包括5个一级指标、13个二级指标、56个三级指标。一级指标生理需要、安全需要、爱与归属的需要、尊重的需要、自我实现的需要的权重分别为0.343、0.371、0.091、0.076、0.127，二级指标的权重为0.024~0.192，三级指标的权重为0.001~0.089。 结论 基于马斯洛需要层次论构建的≤3岁烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系具有较好的科学性、可靠性，可以为该年龄段烧伤患儿居家护理提供参考。 Abstract:Objective To establish an evaluation index system of home care quality for caregivers of children aged ≤3 years with burns. Methods The combined approach of qualitative and quantitative research was used, and the fundamental principles of constructing an index system was followed. From January to February 2022, through literature analysis, conducting a semi-structured interview on 6 female nurses aged 31 to 51 years who worked for more than 10 years in the Department of Burns, Plastic Surgery, and Aesthetic Medicine of General Hospital of Ningxia Medical University, as well as 15 caregivers (11 females and 4 males) of hospitalized children with burns aged 28 to 54 years who received professional training from nursing staff, a preliminary evaluation index system of home care quality for caregivers of children ≤3 years old with burns was established using Maslow's hierarchy of needs as theoretical guidance. From March to June 2022, the Delphi method was applied to conduct inquiry by correspondence with 15 experts in relevant fields who met the inclusion criteria and were employed in general hospitals, specialized hospitals, and universities in the Ningxia Hui Autonomous Region (with their general information being recorded), and the evaluation index system was established and the weights of indicators at all levels were determined by the analytic hierarchy process. The effective recovery ratio of the inquiry form was calculated to determine the level of enthusiasm of experts, the average authority coefficient of all indicators was calculated to determine the level of expert authority, the average importance assignment and full score ratio of all indicators were calculated to determine the concentration of expert opinions, and the average Kendall's harmony coefficients and mean coefficient of variation for all indicators were calculated to determine the degree of coordination of expert opinions. The Kendall's harmony coefficients for the first level indicators, the total second level indicators, and the total third level indicators in each round of correspondence inquiry were statistically analyzed with chi-square test. Results The preliminary evaluation index system of home care quality for caregivers of children ≤3 years old with burns included 5 first level indicators, 13 second level indicators, and 55 third level indicators. The majority of the 15 experts were women, aged 32-56 years, all with a bachelor's degree or above education background, intermediate or above professional titles, and worked for 14-31 years. The effective recovery ratios of the first and second rounds of inquiry forms were 1 (15/15) and 0.93 (14/15), respectively. The average authority coefficients of all indicators in the first and second rounds of correspondence inquiries were 0.87 and 0.90, respectively. The average importance assignment and average full score ratio of all indicators were 4.25 and 0.68 respectively in the first round of inquiry, and 4.39 and 0.70 respectively in the second round of inquiry. In the first and second rounds of inquiries, the average Kendall's harmony coefficients for all indicators were 0.50 and 0.62, respectively, and the average coefficients of variation for all indicators were 0.15 and 0.14, respectively. The Kendall's harmony coefficients of the five first level indicators (physiological needs, safety needs, needs for love and belonging, needs for respect, and needs for self-realization), the total second level indicators, and the total third level indicators in the first and second rounds of correspondence inquiries were statistically significant (with χ 2 values of 22.18, 20.36, 23.42, 25.81, 21.44, 124.73, 524.05 and 24.27, 19.85, 22.39, 27.52, 20.83, 102.38, 503.27, respectively, P<0.05). The final evaluation index system of home care quality for caregivers of children ≤3 years old with burns included 5 first level indicators, 13 second level indicators, and 56 third level indicators. The weights of the first level indicators for physiological needs, safety needs, needs for love and belonging, needs for respect, and needs for self-realization were 0.343, 0.371, 0.091, 0.076, and 0.127, respectively. The weights of the second level indicators were 0.024 to 0.192, and the weights of the third level indicators were 0.001 to 0.089. Conclusions The evaluation index system of home care quality for caregivers of children ≤3 years old with burns established on the basis of Maslow's hierarchy of needs theory is scientific and reliable, and can serve as a reference for home care of children with burns in this age group. -
Key words:
- Burns /
- Home nursing /
- Caregivers /
- Evaluation index /
- Maslow's hierarchy of needs theory
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创伤、烧伤或手术所导致的增生性瘢痕往往难以控制，可导致严重的生理和心理问题［1, 2］，但有效的预防和治疗措施仍然非常有限。皮肤Fb是创面修复的主要成分之一，其迁移和增殖等生物学行为有序而协调地进行有助于创面修复，而Fb生物学行为的异常可导致创面不愈合或者增生性瘢痕的形成。既往研究表明，在TGF-β等生长因子的刺激下，Fb被激活并过度增殖，合成并分泌胶原蛋白以致大量ECM沉积，从而促进增生性瘢痕的形成［3］。瘢痕组织中Fb异常增殖是瘢痕组织过度生长和持续存在的主要原因，而Fb运动能力的增强和排列的改变可导致挛缩畸形［4］。因此，干预Fb增殖及运动可能是寻求瘢痕治疗方法的重要途径。
组蛋白是真核细胞染色体的重要构成成分，组蛋白乙酰化是其转录后修饰的一种重要形式［5］。正常生理条件下，组蛋白乙酰转移酶和组蛋白脱乙酰酶（HDAC）之间的活性竞争共同调节组蛋白乙酰化，进而调控染色质重组、基因转录、细胞分裂、血管新生、细胞分化及凋亡等一系列生物学行为［6, 7, 8］。HDAC6是Ⅱ型HDAC家族成员之一，在纤维化疾病的发生发展中发挥重要作用［9, 10］，但HDAC6在皮肤Fb中的作用鲜见报道。本研究通过将HDAC6高度选择性抑制剂Tubastatin A［11］作用于人皮肤Fb，观察其对Fb增殖及运动性的影响，以探讨其作为抗瘢痕药物的可能性及作用机制。
1. 材料与方法
1.1 细胞及主要试剂与仪器来源
人皮肤Fb（HSF）株购自苏州北纳生物细胞库，胎牛血清购自美国Gibco公司，DMEM培养液购自美国HyClone公司，Tubastatin A粉剂及二甲基亚砜（DMSO）购自美国Selleck公司，细胞计数试剂盒8（CCK-8）购自海门市碧云天生物技术研究所，兔抗小鼠胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）单克隆抗体及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）单克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司，辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔抗小鼠GAPDH单克隆抗体购自美国Proteintech公司，HRP标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Click-it®5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）成像检测试剂盒及4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）购自美国Sigma公司。
Varioskan Flash型多功能酶标仪购自美国Thermo Scientific公司，TCS-SP5型激光扫描共聚焦显微镜购自德国Leica公司，LSM510 Meta型活细胞工作站购自德国Zeiss公司，ChemiDoc XRS型凝胶成像仪购自美国Bio-Rad公司。
1.2 实验方法
1.2.1 HSF的培养及Tubastatin A工作液的配制
采用含100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素、体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养液（下称完全培养液）置于37 ℃、含体积分数5%二氧化碳与体积分数21%氧气、湿度95%的条件下培养（下称常规培养）HSF，隔天换液1次，取对数生长期细胞用于后续的实验。采用DMSO溶解并稀释Tubastatin A粉剂，获取浓度为5 mmol/L的母液，抽滤除菌，分装后于-20 ℃储存备用。处理细胞前解冻，并用完全培养液稀释成1、5、10 μmol/L。
1.2.2 CCK-8法检测不同浓度Tubastatin A对HSF增殖的影响
取HSF，用完全培养液调整细胞浓度为7.5×104个/mL，接种于96孔板中，每孔100 μL。细胞贴壁后弃去原培养液，PBS冲洗3次，按照随机数字表法分为阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组，每组设6个复孔，3种浓度Tubastatin A组分别加入含相应终物质的量浓度的Tubastatin A的培养液，阴性对照组加入含终体积分数0.1%DMSO的完全培养液。各组细胞常规培养24 h后，每孔加入CCK-8溶液10 μL，常规培养2 h。采用多功能酶标仪检测波长450 nm处的吸光度值，以此代表细胞增殖活力。本实验重复3次，结果取均值。
1.2.3 EdU染色法检测不同浓度Tubastatin A对HSF增殖的影响
取HSF，用完全培养液调整细胞浓度为5×104个/mL，接种于细胞爬片上，同1.2.2进行细胞分组及处理，每组设3个复孔。各组细胞常规培养24 h后，加入10 μmol/L EdU工作液1 mL，37 ℃常规培养2 h，经PBS漂洗、40 g/L多聚甲醛固定、体积分数10%山羊血清室温封闭1 h后，加入DAPI 25 μL染细胞核，PBS再次漂洗后封片、630倍激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞EdU阳性染色（绿色荧光）、细胞核阳性染色（蓝色荧光）任意情况，每组选取3个视野拍照。计算EdU阳性细胞率（以此代表细胞增殖活力），EdU阳性细胞率=绿色荧光细胞数÷蓝色荧光细胞数×100%［12］。本实验重复3次，结果取均值。
1.2.4 Tubastatin A对HSF运动性的影响
采用活细胞工作站检测。取HSF，用完全培养液调整细胞浓度为5×104个/mL，接种于24孔板，每孔100 μL。细胞贴壁后弃去原培养液，用PBS冲洗3次，同1.2.2进行细胞分组及处理，每组设3个复孔。各组细胞常规培养24 h后，在活细胞工作站100倍倒置相差显微镜下观察并记录3 h内细胞运动轨迹，各组细胞观察数不少于30个。用ImageJ 1.8.0图像分析软件（美国国立卫生院）分析细胞运动性，以细胞核为参照点获取细胞运动轨迹，测算细胞运动的曲线距离，计算细胞曲线运动速度［13］。细胞曲线运动速度=细胞曲线运动距离÷细胞运动时间。本实验重复3次，结果取均值。
1.2.5 Tubastatin A对HSF ERK1/2活性的调节作用
采用蛋白质印迹法检测。取HSF，用完全培养液调整细胞浓度为2×106个/mL，接种于6孔板，每孔1 mL。细胞同1.2.2进行分组及处理，每组设3个复孔。常规培养24 h后，于冰上裂解细胞，提取细胞总蛋白并定量，取20 μg蛋白样品，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，湿法转膜，50 g/L脱脂奶粉溶液室温封闭2 h。加入兔抗小鼠p-ERK1/2单克隆一抗（稀释比为1∶1 000）、兔抗小鼠ERK1/2单克隆一抗（稀释比为1∶1 000）、HRP标记的兔抗小鼠GAPDH单克隆一抗（稀释比为1∶5 000），4 ℃孵育过夜。次日以含吐温20的三羟甲基氨基甲烷盐缓冲液洗膜3次，每次15 min，然后加入HRP标记的山羊抗兔IgG多克隆二抗（稀释比为1∶5 000），室温孵育1 h。化学发光、显影，凝胶电泳仪获取图像，采用仪器自带的Quantity One软件分析目标条带，以GAPDH为内参照，对p-ERK1/2与ERK1/2的蛋白表达进行定量，并计算p-ERK1/2与ERK1/2比值，表示ERK1/2活性。将阴性对照组的p-ERK1/2与ERK1/2比值设定为1，其余各组p-ERK1/2与ERK1/2比值与阴性对照组的比值作为各组p-ERK1/2与ERK1/2比值的相对结果。本实验重复3次，结果取均值。
1.3 统计学处理
采用SPSS 13.0统计软件进行分析。所有计量资料数据均符合正态分布，以
2. 结果
2.1 不同浓度Tubastatin A对HSF增殖的影响
2.1.1 CCK-8法
培养24 h后，阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力分别为1.19±0.07、0.73±0.04、0.67±0.03、0.57±0.06，组间总体比较，差异有统计学意义（F=36.41，P<0.001）。培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力均显著下降（P<0.001）；与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力无明显变化（P=0.340），而10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（P=0.018）；而5 μmol/L Tubastatin A组与10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力相近（P=0.129）。
2.1.2 EdU染色法
培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞EdU染色荧光强度减弱，见图1。培养24 h后，阴性对照组、1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组EdU阳性细胞率分别为1.00、0.76±0.04、0.66±0.04、0.57±0.03，组间总体比较，差异有统计学意义（F=38.83，P<0.001）。培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组EdU阳性细胞率均显著下降（P<0.001）；与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组及10 μmol/L Tubastatin A组EdU阳性细胞率显著下降（P=0.026、<0.001）； 5 μmol/L Tubastatin A组与10 μmol/L Tubastatin A组EdU阳性细胞率相近（P=0.053）。
1 EdU染色法检测阴性对照组及Tubastatin A处理3组HSF增殖活力 EdU-DAPI×630，图中标尺为25 μm。1A、1B、1C.分别为阴性对照组细胞EdU染色、细胞核染色、细胞EdU染色与细胞核染色重叠图片，细胞核完整，EdU阳性染色细胞较多；1D、1E、1F.分别为1 μmol/L Tubastatin A组细胞EdU染色、细胞核染色、细胞EdU染色与细胞核染色重叠图片，细胞核完整，EdU阳性染色细胞较阴性对照组明显减少；1G、1H、1I及1J、1K、1L.分别为5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞EdU染色、细胞核染色、细胞EdU染色与细胞核染色重叠图片，EdU阳性染色细胞均较1 μmol/L Tubastatin A组减少注：HSF为人皮肤成纤维细胞，EdU为5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷，DAPI为4'，6-二脒基-2-苯基吲哚；细胞EdU阳性染色为绿色，细胞核阳性染色为蓝色，绿色+蓝色双荧光染色为增殖的HSF2.2 Tubastatin A对HSF运动性的影响
2.2.1 细胞运动范围
观察3 h内，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞的运动范围与阴性对照组相比均明显缩小，并呈一定的浓度依赖性。见图2。
2 活细胞工作站观察阴性对照组及Tubastatin A处理3组人皮肤成纤维细胞3 h内的运动范围 倒置相差显微镜×100。2A.阴性对照组细胞运动范围较大；2B、2C、2D.分别为1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞运动范围，均较图2A明显缩小注：细胞运动起点均为坐标（0，0），运动终点为位于4个象限中的圆点，连接两者之间的曲线为细胞运动轨迹，数据前“-”表示相应轴线上的方向2.2.2 细胞运动速度
观察3 h内，阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞的曲线运动速度分别为（0.780±0.028）、（0.594±0.023）、（0.469±0.028）、（0.391±0.021）μm/min，组间总体比较，差异有统计学意义（F=44.55，P<0.001）。观察3 h内，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度均显著下降（P<0.001）；与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度显著下降（P=0.002、<0.001）；与5 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显下降（P=0.042）。
2.3 Tubastatin A对HSF ERK1/2活性的调节作用
培养24 h后，阴性对照组、1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性分别为1.00、0.70±0.03、0.49±0.05、0.37±0.05，组间总体比较，差异有统计学意义（F=52.84，P<0.001）。培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（P<0.001）；与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（P=0.001、<0.001）；与5 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（P=0.044）。见图3。
3 蛋白质印迹法检测阴性对照组及Tubastatin A处理3组人皮肤成纤维细胞中ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达水平注：ERK1/2为胞外信号调节激酶1/2，p-ERK1/2为磷酸化ERK1/2，GAPDH为3-磷酸甘油醛脱氢酶；1.阴性对照组，2、3、4.分别为1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组3. 讨论
哺乳动物细胞中HDAC主要包括4种类型，其中Ⅰ型有HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8，Ⅱ型有HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9、HDAC10，Ⅲ型有SIRT1-7，Ⅳ型有HDAC11［14, 15］。HDAC6主要分布于胞质，而其他HDAC主要定位于细胞核中，因而HDAC6具有不同于其他家族成员的分子特征与功能。从结构上看，HDAC6羧基端的去乙酰化酶同源区后紧跟1个特定的泛素化结合位点，可使组蛋白以外的蛋白质发生去乙酰化［16］。因此，HDAC6是一种独特的去乙酰化酶。
瘢痕增生的基本过程是Fb大量增殖，导致组织过度纤维化［17, 18］。HDAC参与多种组织和器官纤维化的发生和发展，包括心脏、肾脏、肝脏和肺等［19, 20, 21］。研究表明，HDAC抑制剂可下调信号转导及转录激活因子3、TGF-β1等信号通路［22, 23, 24］，抑制Fb合成胶原蛋白，减少ECM沉积，从而抑制组织纤维化，提示HDAC活性增高可促进组织器官纤维化的发生。近期研究表明，HDAC广谱抑制剂曲古抑菌素A（TSA）通过抑制Smads和Sp1的蛋白表达来抑制TGF-β作用下皮肤Fb的胶原合成与分泌［25］。此外，有研究表明，TSA具有抑制人角膜Fb合成和分泌ECM的作用［26］。这些研究提示，HDAC的活性增加可能是瘢痕形成过程中一个新的促纤维化机制。Tubastatin A是一种选择性HDAC6抑制剂，其对HDAC6的选择性抑制作用远远大于其他HDAC［27］。HDAC6可通过调节Notch1信号通路，促进细胞存活及增殖，而抑制HDAC6可诱导细胞凋亡，抑制细胞周期［28, 29］。然而，HDAC6在HSF增殖及运动中的作用尚鲜见报道。本研究采用HDAC6选择性抑制剂Tubastatin A刺激HSF，通过CCK-8法及EdU染色检测细胞增殖活力，采用活细胞工作站记录细胞运动轨迹并分析细胞运动范围和曲线运动速度，结果表明，不同浓度的Tubastatin A作用后HSF增殖活力下降、运动范围缩小、曲线运动速度下降，并呈现一定的Tubastatin A浓度依赖性，即Tubastatin A浓度越高，HSF增殖和运动性下降越明显。本研究表明，Tubastatin A可显著下调HSF的增殖和运动性。
ERK1/2是MAPK家族成员之一，其发生磷酸化修饰后活性增加，对细胞增殖和运动有重要调节作用［30, 31］，ERK1/2活性通常以p-ERK1/2与ERK1/2比值表示。既往研究表明，ERK1/2可通过诱导c-Myc和缺氧诱导因子1α，激活增殖相关信号转导［32］。新近研究表明，皮肤瘢痕组织及缺氧处理的皮肤Fb中p-ERK1/2水平增加［33］，ΕΡΚ1/2信号通路参与调节Fb的增殖、迁移、侵袭等生物学行为［34］。有关肿瘤侵袭转移的研究表明，HDAC6过表达激活ERK1/2信号通路，从而促进肿瘤的生长［35］。本研究结果表明，在HDAC6的选择性抑制剂Tubastatin A作用下，HSF中ERK1/2磷酸化水平显著下降，并呈一定的Tubastatin A浓度依赖性，即Tubastatin A浓度越高，HSF中ERK1/2活性下降越明显。这表明HDAC6的选择性抑制剂Tubastatin A可显著抑制HSF中ERK1/2的活性。
综上，在HSF中，ERK1/2信号通路对HDAC6选择性抑制剂Tubastatin A敏感，ERK1/2活性降低可能参与介导了Tubastatin A对HSF增殖及运动性的抑制效应。这在一定程度上揭示了Tubastatin A在抗HSF增殖和运动中的作用，为Tubastatin A作为抗瘢痕辅助用药提供了理论依据。
张娟、刘晓慧：研究设计、研究实施、论文撰写、论文修订；柴雪珺、马月兰、李海芬：研究实施、资料收集；马惠珍：研究实施、获取研究经费、提供材料支持所有作者均声明不存在利益冲突 -
参考文献
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表1 15名专家对3岁及以下烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系的2轮函询意见协调程度
表1. The degree of coordination of 15 experts' opinions in two rounds of correspondence inquiries on the evaluation index system of home care quality for caregivers of children aged 3 years and below with burns
类别 第1轮函询 第2轮函询 指标个数 肯德尔和谐系数 χ 2值 P值 指标个数 肯德尔和谐系数 χ 2值 P值 生理需要 4 0.46 22.18 <0.001 4 0.53 24.27 <0.001 安全需要 3 0.40 20.36 <0.001 3 0.48 19.85 <0.001 爱与归属的需要 2 0.38 23.42 <0.001 2 0.50 22.39 <0.001 尊重的需要 2 0.35 25.81 <0.001 2 0.48 27.52 <0.001 自我实现的需要 2 0.42 21.44 <0.001 2 0.53 20.83 <0.001 总二级指标 13 0.37 124.73 <0.001 13 0.42 102.38 <0.001 总三级指标 61 0.40 524.05 <0.001 56 0.55 503.27 <0.001 
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表2 15名专家对确立的3岁及以下烧伤患儿照护者居家护理质量评价指标体系的重要性赋值和权重赋值
表2. Importance assignment and weight assignment of the evaluation index system for home care quality of caregivers of children aged 3 years and below with burns by 15 experts
各级指标 重要性赋值（分， 变异系数 权重 生理需要 4.56±0.23 0.05 0.343 营养 4.52±0.25 0.06 0.093 居家期间患儿体重和身长符合正常成长标准 4.65±0.23 0.05 0.011 观察患儿食欲情况（据食、厌食），寻找食欲不佳的原因 4.57±0.28 0.06 0.019 为患儿选择种类多、营养丰富、搭配合理的食物，按需及时添加辅食 4.31±0.35 0.08 0.014 帮助患儿规律、按时、少量及多次进食，注意饮水或奶制品的温度 4.06±0.27 0.07 0.029 对进食障碍患儿遵医嘱给予其他途径营养支持，营养不足时及时带患儿就医 4.45±0.24 0.05 0.017 穿着 4.13±0.15 0.04 0.050 给患儿穿棉质、柔软、透气和不掉色的衣服 4.21±0.18 0.04 0.007 给瘢痕患儿穿的衣服宽松、易穿脱、便于活动 4.20±0.21 0.05 0.005 为会阴部有创面的患儿及时更换尿不湿 4.26±0.16 0.04 0.016 注意对患儿身体暴露有瘢痕部位采取防晒措施 4.32±0.23 0.05 0.021 疼痛 4.26±0.32 0.08 0.080 识别患儿出现疼痛的部位 4.37±0.25 0.06 0.027 明确导致患儿出现疼痛的原因 4.28±0.18 0.04 0.010 判断患儿疼痛时的严重程度 4.15±0.21 0.05 0.028 患儿疼痛原因明确时给予非药物镇痛或遵医嘱用药，未明确原因时及时带患儿就医 4.17±0.23 0.06 0.014 肢体功能 4.38±0.32 0.07 0.119 通过功能训练预防患儿创面愈合后出现瘢痕增生、挛缩或畸形 4.65±0.37 0.08 0.009 根据烧伤部位进行肢体功能训练，用患儿喜爱的玩具激发训练兴趣 4.26±0.25 0.06 0.007 患儿因面部瘢痕存在张口困难时，用玩具式开口训练器帮助其练习开口 4.28±0.21 0.05 0.027 协助患儿做分开手指、伸指、屈指、抓握、腕关节旋转、双手高举训练 4.32±0.36 0.08 0.025 协助患儿做仰头、低头、旋转、伸颈训练 4.22±0.17 0.04 0.008 协助患儿做关节屈曲、外展、旋转训练 4.26±0.13 0.03 0.005 功能训练时循序渐进，动作轻柔，以患儿能接受的力量和时长为主 4.52±0.24 0.05 0.025 患儿出现关节脱位等异常时，及时带去医院就诊 4.59±0.10 0.02 0.010 安全需要 4.64±0.17 0.04 0.371 居家安全 4.53±0.25 0.06 0.155 居家环境整洁舒适，定期清扫、整理 4.48±0.18 0.04 0.030 保障居家用水、用电、生活场景（主要是客厅、厨房）的安全，消除不安全因素 4.75±0.26 0.05 0.032 患儿居家或室外活动时，注意为其预留出相对足够的周围空间 4.63±0.31 0.07 0.066 患儿日常活动（爬、走、跑、进餐、睡眠）时，有专人陪伴 4.48±0.29 0.06 0.026 创面处理 4.63±0.20 0.04 0.024 正确包扎、保护患儿创面 4.62±0.27 0.06 0.002 处理患儿创面前注意清洁双手，用清洁棉签或纱布护理皮肤残余创面 4.45±0.24 0.05 0.003 用清洁棉签为患儿涂抹能够预防瘢痕和促进创面愈合的药物 4.53±0.26 0.06 0.003 遵医嘱给患儿正确穿戴局部弹力套 4.26±0.19 0.04 0.002 帮助患儿睡觉时保持正确卧位，抬高伤侧肢体 4.42±0.21 0.05 0.005 帮助患儿卧位时保护创面之外的皮肤完好、无受压 4.31±0.22 0.05 0.002 患儿因创面瘙痒抓挠时，为其穿戴手保护套，防止抓伤 4.28±0.20 0.05 0.001 观察患儿创面愈合状况，接受医护人员的定期随访，必要时带患儿按期门诊复查 4.72±0.34 0.07 0.002 居家意外伤害 4.65±0.38 0.08 0.192 预防患儿发生二次烧伤事件 4.72±0.28 0.06 0.064 预防患儿居家时发生跌伤、碰伤、刀割伤和触电伤 4.58±0.31 0.07 0.089 预防患儿居家时发生其他意外伤害事件（如宠物抓伤及咬伤、高处摔落伤） 4.53±0.32 0.07 0.035 为患儿购买意外伤害保险 4.29±0.16 0.04 0.002 爱与归属的需要 4.73±0.28 0.06 0.091 有害健康行为 4.65±0.20 0.04 0.050 观察患儿睡眠质量（时长、醒来的次数、有无惊醒、喃喃自语） 4.29±0.15 0.03 0.011 识别患儿有无不良情绪行为（哭闹不止、易受惊吓、不笑不语） 4.23±0.25 0.06 0.011 预防患儿“自伤”或“伤他” 4.38±0.17 0.04 0.020 教育患儿应对紧急情况的方法，如拨打紧急电话、寻求周围人的帮助和自救方法 4.25±0.16 0.04 0.006 健康照护 4.63±0.25 0.05 0.040 态度积极，愿意主动陪伴，全心全意照护患儿 4.33±0.17 0.04 0.012 主动塑造与患儿的亲密关系 4.42±0.26 0.06 0.004 维持与亲属及家庭成员的良好关系，保持家庭和谐 4.57±0.29 0.06 0.003 安抚患儿不良情绪，避免不良行为 4.36±0.21 0.05 0.011 留守儿童的照护者积极寻求来自家庭、社区和社会福利机构的帮助 4.06±0.15 0.04 0.008 尊重的需要 4.28±0.27 0.06 0.076 内部尊重 4.38±0.13 0.03 0.046 家庭核心成员对患儿持接纳态度并关心患儿 4.49±0.26 0.06 0.022 引导家庭内年长儿或低龄儿接纳和爱护患儿 4.37±0.20 0.05 0.023 外部尊重 4.52±0.38 0.08 0.030 帮助患儿回归温暖家庭，密切接触的亲朋好友适时为患儿提供帮助和关爱 4.73±0.22 0.05 0.017 帮助患儿回归社会，带领患儿多接触同龄小朋友，与小伙伴一起玩耍和学习 4.39±0.16 0.04 0.012 自我实现的需要 4.53±0.27 0.06 0.127 外观形象 4.13±0.21 0.05 0.076 患儿烧伤所处部位的瘢痕程度较轻，对日常活动不造成影响 4.26±0.18 0.04 0.039 患儿身体正常暴露部位无瘢痕形成或仅色素沉着，患儿外观变化在可接受范围内 4.83±0.26 0.05 0.015 周围人正确认识患儿经历的烧伤事件，接纳患儿外观形象发生的改变 4.27±0.22 0.05 0.021 成长发育 4.15±0.16 0.04 0.051 采取积极的成长教育方式，给患儿创造良好的成长环境，注重童年的健康成长 4.52±0.75 0.17 0.012 引导患儿通过观察和模仿来探索周围环境，激发患儿内在驱动力 4.61±0.33 0.07 0.021 尝试挖掘患儿潜能，引导患儿树立积极、乐观、坚韧的生活态度 4.64±0.27 0.06 0.017 注：变异系数=重要性赋值的标准量÷均值
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