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γ干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子β/Smad信号通路的作用

刘佳琦 胡大海 张战凤 官浩 折涛 张军 白晓智

陈伟, 魏在荣, 吴必华, 等. 大鼠施万细胞与成纤维细胞联合移植对大鼠失神经支配穿支皮瓣神经再生的影响及其机制[J]. 中华烧伤杂志, 2019, 35(2): 134-142. Doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2019.02.009
引用本文: 刘佳琦, 胡大海, 张战凤, 等. γ干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子β/Smad信号通路的作用[J]. 中华烧伤杂志, 2009, 25(6): 454-459. Doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2009.06.019
Chen Wei, Wei Zairong, Wu Bihua, et al. Effects of combined transplantation of rat Schwann cells and fibroblasts on nerve regeneration of denervated perforator flaps in rats and the mechanism[J]. Chin j Burns, 2019, 35(2): 134-142. Doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2019.02.009
Citation: LIU Jia-qi, HU Da-hai, ZHANG Zhan-feng, et al. Effects of interferon-gamma on the transforming growth factor beta/Smad pathway in keloid-derived fibroblasts[J]. Chin j Burns, 2009, 25(6): 454-459. Doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2009.06.019

γ干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子β/Smad信号通路的作用

doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2009.06.019
基金项目: 

国家自然科学基金(30600644).

Effects of interferon-gamma on the transforming growth factor beta/Smad pathway in keloid-derived fibroblasts

  • 摘要: 目的了解γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕疙瘩Fb(KFb)中TGF-β/Smad信号通路的作用,探讨IFN-γ治疗病理性瘢痕的可能机制。方法切取3例患者的瘢痕组织,体外分离培养KFb,实验选用第3-5代细胞。(1)将KFb分为:对照组,加无血清DMEM培养;TGF-β1组,用10ng/mL的TGF-β1单独作用;IFN-γ组,用100ng/mL的IFN-γ单独作用;TGF-1,+IFN-γ组,10ng/mL的TGF-β1与100ng/mL的IFN-γ联合作用。采用实时荧光定量RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光细胞化学染色法,分别检测结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA、蛋白表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达与阳性细胞表达情况。(2)另取KFb,用10ng/mL的IFN-γ作用,于作用前及作用后30min和1、2、4、6、8h通过实时荧光定量RT-PCR检测Smad3和Smad7的mRNA表达,于作用前及作用后1、2、4、6、8h用蛋白质印迹法检测Smad3和Smad7的蛋白表达。(3)另取KFb,根据添加的IFN-γ终浓度不同分为1、10、100ng/mL IFN-γ组,均作用4h;设立未添加IFN-γ的KFb为对照组。同前检测各组Smad3和Smad7的mRNA及蛋白表达。结果(1)IFN-γ组KFb CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.017±0.009与1.198±0.004,较对照组(0.024±0.013与1.229±0.011)显著减少(P〈0.05);TGF-β1+IFN-γ组CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.634±0.138与1.204±0.010,较TGF-β1组(1.331±0.298与1.727±0.004)显著减少(P〈0.01)。IFN-γ组KFb中,α-SMA阳性细胞荧光强度(0.922±0.059)和α-SMA蛋白表达量(0.3051±0.0031)较对照组(1.055±0.005与0.4513±0.0094)显著减少(P〈0.01);TGF-β1+IFN-γ组-α-SMA阳性KFb荧光强度(1.129±0.004)和α-SNA蛋白表达量(0.6734±0.0098)较TGF-β1组(1.270±0.005与1.3842±0.0024)显著减少(P〈0.01)。(2)10ng/mL IFN-γ作用后第1个时相点,Smad3的mRNA和蛋白表达量均出现一过性增高,随后降低,mRNA表达量于作用后4h降至最低点,随后缓慢上升,至作用后8h仍低于作用前(P〈0.01);其蛋白表达量于作用后2-8h显著低于作用前(P〈0.01)。而Smad7的mRNA和蛋白表达量在INF-γ作用后逐渐增高,分别于作用后2、4h达峰值随后降低,至作用后8h仍高于作用前(P〈0.05)。(3)与对照组比较,1、10、100ng/mL IFN-γ组Smad3的mRNA及蛋白表达量显著减少(P〈0.05或P〈0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达量显著增加(P〈0.05或P〈0.01),且随IFN-γ浓度升高,减少或增高幅度愈为显著。结论IFN-γ可呈时间和剂量依赖方式下调Smad3、上调Smad7,降低基础状态下或经TGF-β1诱导后KFb的CTGF和α-SMA表达量,表现出对TGF-β/Smad信号通路的显著拮抗作用,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制。

     

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出版历程
  • 网络出版日期:  2021-10-28
  • 刊出日期:  2009-12-20

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