摘要: 目的了解胰岛素刺激后脂肪干细胞（ADSC）旁分泌因子的变化及其对人血管内皮细胞的作用。方法（1）分离培养人ADSC，按照随机数字表法将细胞分为胰岛素刺激组（含终浓度1×10 -7mol／L胰岛素的无血清DMEM培养液培养）和对照组（未加胰岛素的无血清DMEM培养液培养），每组6孔。3d后收集ADSC培养上清液（ADSC—CM），ELISA法测定血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）表达量。（2）分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），将细胞按照随机数字表法分为4组，均采用内皮细胞专用培养液培养：胰岛素刺激ADSC—CM组，培养液中加入经胰岛素刺激后的ADSC—CM；无刺激ADSC—CM组，培养液中含无胰岛素刺激的ADSC—CM；胰岛素组，培养液中加入终浓度为1×10 -7 mol／L的胰岛素；空白对照组，培养液中不添加刺激因素。3d后噻唑蓝法测定HUVEC增殖情况，数据用吸光度值表示。（3）另取HUVEC同上分为4组，培养12h时，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素双染色法测定细胞凋亡情况。（4）另取HUVEC同上分为4组后，体外细胞划痕法测定划痕后12、24、36、48h时HUVEC迁移距离。对实验数据行t检验。结果（1）胰岛素刺激组VEGF、HGF含量分别为（643±64）、（930±68）pg／mL，显著高于对照组的（287±47）、（577±84）pg／mL（t值分别为18．869、18．475，P值均小于0．05）。（2）胰岛素刺激ADSC—CM组、无刺激ADSC—CM组吸光度值分别为0．847±0．042、0．798±0．022，均高于胰岛素组的0．665±0．028（t值分别为4．579、3．732，P值均小于0．01）及空白对照组的0．674±0．031（t值分别为3．761、4．073，P值均小于0．01）；胰岛素刺激ADSC—CM组吸光度值较无刺激ADSC—CM组明显增高（t=2．576，P〈0．05）。（3）胰岛素刺激ADSC-CM组、无刺激ADSC—CM组细胞凋亡率分别为（5．8±1．9）％、（9．0±2．0）％，均明显低于胰岛素组的（30．4±6．0）％（t值分别为12．891、10．417，P值均小于0．05）和空白对照组的（31．4±7．4）％（t值分别为11．474、9．783，P值均小于0．05）；无刺激ADSC—CM组细胞凋亡率高于胰岛素刺激ADSC—CM组（t=8．548，P〈0．05）。（4）划痕后36、48h时，胰岛素刺激ADSC—CM组、无刺激ADSC—CM组HUVEC迁移距离明显长于胰岛素组与空白对照组，且胰岛素刺激ADSC—CM组细胞迁移距离大于无刺激ADSC—CM组（t值分别为4．076、4．573，P值均小于0．05）。结论胰岛素干预后ADSC旁分泌能更有效促进人血管内皮细胞增殖、迁移并抑制其凋亡，有利于组织血管化。