摘要: 目的 观察炎症介质γ干扰素及TNF-α联合作用对肠上皮屏障功能的影响并探讨其分子机制.方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型,分别在预处理的24孔板与6孔板中采用DMEM培养基培养.将2种培养板中细胞均按随机数字表法分为对照组（常规培养）、γ干扰素组（加入终浓度为10 ng/mL γ干扰素培养）、TNF-α组（加入终浓度为10 ng/mL TNF-α培养）、γ干扰素＋TNF-α组（加入终浓度均为10 ng/mL的γ干扰素与TNF-α培养）.24孔板细胞处理后0 h（即刻）及6、12、24、36、48 h,用电阻测定仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻（TER）;于48 h分别采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖荧光示踪法与免疫荧光法,检测肠上皮细胞通透性及紧密连接咬合蛋白的分布与形态变化.6孔板细胞处理24 h时,用蛋白质印迹法检测咬合蛋白、磷酸化肌球蛋白轻链（pMLC）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）蛋白表达.对数据进行单因素方差分析与t检验.结果 （1）对照组各时相点肠上皮细胞TER无明显变化（F=0.86,P＞0.05）;γ干扰素组与TNF-α组TER虽逐渐降低,但与处理后0 h比较差异均无统计学意义（F值分别为1.69、2.47,P值均大于0.05）;γ干扰素＋TNF-α组TER从24 h起显著低于处理后0 h（t=4.97,P＜0.05）,并明显低于其余3组（F=11.54,P＜0.05）.（2）γ干扰素＋TNF-α组的肠上皮细胞通透性[（1197±215）pmo1]显著高于对照组、γ干扰素组与TNF-α组[（303±93）、（328±76）、（797±177）pmol,t值分别为4.8、5.0、6.9,P值均小于0.01].（3）24 h时各组咬合蛋白表达量无明显变化（F=0.26,P＞0.05）.48 h时对照组咬合蛋白排列规则;γ干扰素组及TNF-α组咬合蛋白排列不规则;而γ干扰素＋TNF-α组咬合蛋白排列不连续,发生明显重分布,胞质内分布增加.（4）γ干扰素＋TNF-α组pMLC蛋白表达量（0.95±0.05）显著高于对照组、γ干扰素组与TNF-α组（0.57±0.12、0.56±0.07、0.59±0.10,F=17.97,P＜0.01）,MLCK蛋白表达量（1.57±0.36）也显著高于其余3组（0.85±0.18、1.04±0.23、1.00±0.07,F=9.05,P＜0.05）.结论γ干扰素与TNF-α联合作用通过增加MLCK及pMLC蛋白表达,引起肠上皮屏障功能损害.