摘要: 目的观察Rac1蛋白对表皮干细胞（ESC）迁移运动的调控作用，为完善创面愈合的基础理论以及指导临床应用提供参考。方法将慢病毒空载体FUGW单独和分别与Rac1蛋白抑制型突变体Rac1T17N、Rac1蛋白活化型突变体Rac1Q61L融合后转染入ESC，按照随机数字表法分为3部分进行如下实验。（1）将ESC分别接种于Ⅰ型胶原溶液（20μg／mL）、Ⅳ胶原溶液（20μg／mL）或纤连蛋白溶液（10μg／mL）包被的24孔细胞培养板，采用CytoTox 96比色试剂盒检测ESC对不同基质的黏附率。（2）选取上述黏附于Ⅳ型胶原的1000个ESC，四甲基异硫氰酸罗丹明标记的鬼笔环肽染色，激光扫描共聚焦显微镜下观察黏附细胞的形态延展并比较面积大小。（3）选用Transwell小室，上室加入ESC、下室中加入含基质细胞衍生因子1（SDF-1）的限定性角质形成细胞无血清培养液（以不加SDF—1的培养液为对照），倒置相差显微镜下观察ESC的趋化能力，结果以细胞迁移变化率表示。（4）将ESC接种于6孔细胞培养板孵育12h，加入含4μg／mL丝裂霉素c的培养液继续孵育2h，于单层贴壁细胞划痕，6、12h后统计剩余划痕宽度百分率。对数据进行t检验。结果与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC对Ⅰ型胶原的黏附率明显增加（t=5．302，P〈0．05），转染Rac1T17N的ESC对Ⅰ型胶原（t=13．741，P〈0．05）、Ⅳ型胶原（t=15．676，P〈0．05）及纤连蛋白（t=8．256，P〈0．05）的黏附率均明显下降。激光扫描共聚焦显微镜下观察，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC面积明显增大，细胞边缘有层板状伪足伸出；转染Rac1T17N的ESC面积显著缩小。在趋化因子SDF-1作用下，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率升高43．4％，转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降78．0％；无SDF—1作用时，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降55．2％，转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率未见明显变化（升高1．7％）。划痕后6、12h，转染Rac1Q61L的ESC剩余划痕宽度百分率分别为（39±9）％、（6±5）％，低于转染FUGW的ESC[（43±5）％，t=1．027，P〉0．05；（18±7）％，t=4．389，P〈0．05]；划痕后6、12h，转染Rac1T17N的ESC剩余划痕宽度百分率分别为（81±9）％、（71±11）％，明显高于转染FUGW的ESC（t值分别为11．386、11．726，P值均小于0．05）。结论Rac1蛋白可通过影响ESC的黏附、延展以及趋化能力调控细胞迁移，并可能因此参与ESC促进创面愈合的进程。