摘要: 目的探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）对骨骼肌成肌细胞增殖的调控作用及其信号机制。方法体外培养大鼠骨骼肌成肌细胞株L6，并按随机数字表法分为4组：（1）对照组，培养液中除常规成分外不再添加其他物质；（2）GLP-1组，培养液中加入终浓度10nmol／L的GLP-1；（3）磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂组，培养液中加入终浓度为50nmol／L的PI3K特异性抑制剂渥曼青霉素；（4）GLP-1＋PI3K抑制剂组，培养液中加入终浓度10nmol／L的GLP-1和终浓度50nmol／L的渥曼青霉素。各组细胞接受上述处理后分别继续培养24、48、72h，采用噻唑蓝法测定细胞增殖活性（结果用吸光度值表示）；继续培养24h时，用流式细胞仪检测细胞周期分布，行免疫组织化学染色检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）表达，蛋白质印迹法检测磷酸化（P-）蛋白激酶B（Akt）、p-PI3K的蛋白表达水平。对实验数据行方差分析。结果（1）GLP-1组细胞接受处理后48、72h，增殖活性分别为0．660±0．120、0．870±0．240，均显著高于对照组（0．530±0．060、0．700±0．100，F值分别为5．46、5．90，P〈0．05或P〈0．01）。PI3K抑制剂组各时相点增殖活性均低于对照组。GLP-1＋PI3K抑制剂组处理48、72h，细胞增殖活性分别为0．510±0．080、0．740±0．160，与GLP-1组比较差异均有统计学意义（F值分别为5．46、5．90，P〈0．05或P〈0．01）。（2）处理后24h，GLP-1组S期细胞百分比为（15．7±0．4）％，显著高于对照组[（13．6±0．6）％]和GLP-1＋PI3K抑制剂组[（10．1±0．6）％]；PI3K抑制剂组s期细胞百分比为（6．84±1．2）％，明显低于对照组。以上各项比较F值均为15．39，P值均小于0．01。（3）处理后24h，GLP-1组细胞PCNA增殖指数为（51．24±1．18）％，显著高于对照组[（36．72±1．56）％]和GLP-1＋PI3K抑制剂组[（25．90±1．22）％]；PI3K抑制剂组PCNA增殖指数为（21．70±0．09）％，明显低于对照组。以上各项比较F值均为783．80，P值均小于0．05。（4）处理后24h，GLP-1组细胞p-Akt蛋白表达水平显著高于其余3组，PI3K抑制剂组明显低于对照组。以上各项比较F值均为94．43，P值均小于0．01。GLP-1组、CLP-1＋PI3K抑制剂组p-PI3K蛋白表达水平与对照组接近（F值均为20．94，P值均大于0．05），PI3K抑制剂组较对照组明显降低（F=20．94，P〈0．05）。结论GLP-1可直接作用于骨骼肌成肌细胞，通过加速细胞周期进程，增加DNA合成，促进细胞增殖。该作用与PI3K／Akt信号途径密切相关。