摘要:
目的探讨褪黑激素对人增生性瘢痕Fb增殖和凋亡的影响与机制。方法采用组织块法分离培养人增生性瘢痕Fb。按随机数字表法将细胞分为低、中、高浓度组和对照组。前3组细胞分别采用含1×10^-5、1×10^-3、1mmol/L褪黑激素的培养液培养,对照组不加褪黑激素常规培养。处理后24h进行如下检测:对各组细胞进行形态学观察;用四氮唑复合物(XTT)-硫酸酚嗪甲酯(PMS)比色法检测细胞增殖活性;对细胞行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)和碘化丙啶(PI)双染色后,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡情况;荧光定量RT—PCR法检测细胞周期蛋白E(cyclinE)、p53和FasmRNA表达量。对数据行方差分析和LSD检验。结果形态学观察显示,对照组Fh为长梭形,呈集落分布;3个浓度组Fb随着褪黑激素浓度升高,细胞逐渐分散,胞体变形缩小,胞膜皱缩,核质比例减小。对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组Fb增殖活性(吸光度值)依次下降,分别为1.79.±0.10、1.49±0.15、1.24±0.20、0.92±0.09(F=67.61,P〈0.05);S期细胞百分比依次下降,分别为(16.9±1.3)%、(10.6±1.1)%、(6.1±1.2)%、(3.2±0.8)%(F=286.10,P〈0.05);G2/M期细胞百分比依次下降,分别为(16.7±1.6)%、(13.5±1.1)%、(9.8±1.0)%、(6.0±0.7)%(F:162.69,P〈0.05);早、晚期凋亡细胞百分比依次升高(F值分别为424.05、236.44,P值均小于0.05)。对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞cyclinE的mRNA表达量依次下降,分别为2.90±0.30、1.58±0.21、0.90±0.20、0.24±0.12(F=266.79,P〈0.05);p53和FasmRNA表达量依次升高(F值分别为10.11、12.03,P值均小于0.05)。结论褪黑激素可通过影响细胞cyclinE、p53和Fas基因的表达,抑制增生性瘢痕Fb增殖并诱导该细胞凋亡。