摘要: 目的 了解增生性瘢痕Fb中羟基丙酮酸异构酶同系物（HYI）与P311蛋白相互作用的结合区域. 方法（1）以克隆有P311的pMD18-T质粒为模板,对P311进行PCR扩增；Trizol法提取人增生性瘢痕Fb的总RNA,对HYI进行RT-PCR扩增,采用双酶切法分别构建pGA DT7-P311和pGBKT7-HYI重组载体,PCR及测序验证.采用Prot Seale软件和HNN软件对HYI蛋白进行二级结构分析,据此结果扩增HYI-1（1 ～447 bp）、HYI-2（247 ～447 bp）、HYI-3（1 ～279 bp）、HYI-4（247 ～654 bp）片段,双酶切法构建pGBKT7-HYI-1、2、3、4重组载体,经PCR及测序验证.（2）采用醋酸锂法将酵母细胞AH109制备成感受态细胞,粗略等量分为HYI全长与HYI-1、2、3、4杂交组,以及阳性对照组和阴性对照组.采用聚乙二醇-醋酸锂法,前5组分别同时转化pGBKT7-HyI全长、各片段的重组载体与pGADT7-P311重组载体,后2组分别同时转化pGBKT7-53与pGADT7-RecT重组载体、pGBKT7-Lam与pGADT7-RecT重组载体.转化后即刻,取各组部分细胞分别涂布在缺乏亮氨酸、色氨酸、腺嘌呤及组氨酸的培养基（简称四缺培养基）上,另取各组部分细胞分别涂布在缺乏亮氨酸和色氨酸的培养基（简称二缺培养基）上,培养3～6d,观察菌株生长情况,5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷显色反应检测菌落β半乳糖苷酶表达. 结果（1）克隆出的P311片段与Genbank中P311（序号hsu36189）序列一致.与Genbank中HYI（序号AY775560）序列对比,HYI基因扩增片段在496 bp处的A替换为了G.经验证各重组载体插入片段无误.（2）计算机模拟结果显示,组成HYI蛋白的216个氨基酸中,可能形成α螺旋的氨基酸有101个,可能形成无规则卷曲的氨基酸有90个,可能形成延伸链的氨基酸有25个.（3）HYI-1、2、3、4克隆片段大小与预期相符,经验证各重组载体插入片段无误.（4）除阴性对照组菌株未见在四缺培养基上生长外,其他组菌株均在2种培养基上生长,其中HYI-2（α螺旋结构最少）、HYI-3杂交组长出菌落较少.（5）除生长在二缺培养基上的阴性对照组菌落和生长在四缺培养基上的HYI-2杂交组菌落未见β半乳糖苷酶表达外,其他在四缺培养基上长出的各组菌落均有β半乳糖苷酶表达. 结论 HYI与P311蛋白可能以α螺旋结构紧密结合,在增生性瘢痕Fb向肌成纤维细胞转分化过程中发挥重要作用.