摘要: 目的观察外源性NO对人表皮干细胞（ESC）脱黏附、增殖以及迁移功能的影响。方法采用改良Ⅳ型胶原快速黏附法分离、培养人ESC，倒置相差显微镜下观察其形态；蛋白质印迹法和免疫荧光法观察ESC标志物整合素p，和细胞角蛋H 19（ CK19）的表达。对贴壁生长的ESC行划痕处理，用O（对照）、1、10、100、500 μmolL NO供体S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺（SNAP）作用细胞12、24 h，检测细胞迁移率；Transwe11实验检测SNAP（浓度同上）对ESC趋化能力的影响（计数转膜细胞）。采用0、10、100、500 μmolL SNAP作用细胞1 h，黏附实验检测SNAP对ESC黏附功能的影响，计算黏附抑制率；于上述4种浓度SNAP作用O（即刻）、12、24、48 h，采用酶标仪检测ESC增殖水平，; 数据以吸光度值表示。对数据进行单凶素方差分析和Dunnett z检验。 结果 （1）倒置相差显微镜下可见，细胞培养5-9 d形成小克隆；培养10 -14 d，细胞增殖明显加快。蛋白质印迹法和免疫荧光法检测结果显示，所分离的细胞均能表达CK19和整合素p．。由此鉴定该细胞为ESC。（2）与O μmolL SNAP怍用12、24 h后细胞迁移率[（35.7±0.3）%、（45.7 ＋5.0）%]比较，1-100 μmolLSNAP均能促进ESC迁移，其中100 μmolL SNAP作用后细胞迁移率达峰值[（48.8±2.7）%、（82.1±15.8）%，P值分别为8. 34、5.10，P值均小于0.01]。100 y,mo1/L SNAP作用后转膜细胞数显著多于O μmolL SNAP作用后（t=9. 24，P=0.00）。100、500 μmolL SNAP作用后，ESC黏附能力明显低于OμmolL SNAP作用后（t值分别为4.30、4.67，P值均为0.00）。100、500 μmolL SNAP作用24、48 h，细胞增殖能力明显强于OμmolL SNAP作用后（t值为2.84-8.17，P值均小于0.05）。 结论适宜浓度的外源性NO对体外培养人ESC的迁移功能有促进作用。外源性NO对体外培养人ESC具有脱黏附、促增殖作用。