摘要:
目的观察没药提取物对人皮肤Fh生物学特性的影响,探讨其促进创面愈合的可能机制。 方法从人正常包皮组织中分离并培养Fb,取第3-5代细胞用于实验。(1)将Fh接种至96孔板,按随机数字表法分为对照组,1×10-4、1×10 1、1×10-3、1×10-21、1、10、1×102 g/L没药水提取物组以及上述7种浓度的没药醇提取物组。对照组用含体积分数0. 25%小牛血清的DMEM培养液(简称低浓度血清培养液)培养,各浓度没药水及没药醇提取物组分别用含相应终浓度2种没药提取物的低浓度血清培养液培养。培养48 h,用倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定各组Fh增殖活性(以吸光度值表示)。(2)将Fh分别接种于培养瓶和培养皿中,均按随机数字表法分为2组:1 g/L没药水提取物组,用含终浓度1 g/L没药水提取物的低浓度血清培养液培养;对照组,采用低浓度血清培养液培养。培养72 h,分别采用流式细胞仪、实时荧光定量PCR法检测Fb周期与I、Ⅲ型胶原mRNA的表达。对数据进行LSD-t检验。 结果 (1)各组细胞均呈长梭形生长,1 g/L没药水提取物组细胞融合较对照组更显著。1×10-3、1×10-2、1×10-11,1、10 g/L没药水提取物组Fb吸光度值分别为0. 378±0.032、0.402±0.007、0.390±0.038、0.453±0.036、0.390±0.037,均高于对照组的0. 332±0.044,t值分别为2.24、2.93、2.69、5.73、2.71,P值均小于0.05。1×10-3、1×10-2 g/L没药水提取物组吸光度值分别为0.312±0.048、0.154±0.009,前者与对照组比较,差异; 无统计学意义(t=2.84,P〉0.05);后者显著低于对照组(t=7. 17,P〈0.05)。1×10。3、1×10。1、1、10、1×102 g/L没药醇提取物组Fh吸光度值显著低于对照组(z值为2.30 24. 79,P值均小于0. 05)。(2)1 g/L没药水提取物组CO/G1期细胞百分比为(74.3±6.3)%,明显少于对照组的(82.2 ±7.9)010,z=6.77,P〈0.05;S期及G2/M期细胞百分比分别为(16.6±3.4)%、(9.1±1.6)%,明显多于对照组的(13.3±2.3)%、(4.5±0.8)%,t值分别为7. 53、6.34,P值均小于0.05。1g/L没荮水提取物组Fb中I型胶原mRNA相对表达量(0.89 ±0.08)与对照组(1.00 ±0.06)比较,差异无统计学意义(t=1.17,P〉0.05);Ⅲ型胶原mRNA相对表达量(1.38±0.12)显著高于对照组(1. 00±0.05,t=3.81,P〈0.01)。 结论 没药水提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb细胞周期进程,上调Fb中Ⅲ型胶原mRNA表达,可能与其促进创面愈合的机制相关。