摘要:
目的了解富组蛋白1(Hstl)对人表皮细胞株HaCaT增殖、迁移功能的影响方法(1)常规培养HaCaT细胞,按照随机数字表法(分组方法下同)分为对照组与100、30、3g/mLHsll纰以及10ng/ml。重组人表皮生长因子(rhEGF)组、30μg/mLHstl+10ng/mLrhEGF组,每组样小数为27。对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度Hstl和(或)rhEGF,培养24、48、72h采用细胞计数法检测各组细胞增殖水平。(2)将HaCarr细胞分为对照组与100、30、3μg/mLHstl组。每组样本数为27。对照组不添加刺激因素,后3组分别加入相应浓度Hstl,培养24、48、72h采用流式细胞术检测各组细胞周期,计算增殖指数(PI)。(3)将HaCaT细胞分为对照组、30μg/mLHstl组、10ng/mLrhEGF组、30μg/mLHstl+10ng/mLrhEGF组、15μg/mLHstl+5ng/mLrhEGF组、15μg/mLHstl+10ng/mLrhEGF组,每组样小数为10。对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度的Hstl和(或)rhEGF培养。将各组细胞分为2份,一份用丝裂霭素C处理2h,另一份不作处理,均行划痕实验,划痕后0(即刻)、16、24h观测细胞迁移情况并计t算划痕愈合面积百分比。对数据行方差分析、LSD-t检验或Dunnettt检验。结果(1)培养24h,10ng/mLrhEGF组、30μg/mLHstl+10ng/mLrhEGF组细胞数显若高于对照组(t值分别为3.813、5.410,P〈0.05或P〈0,01)。与培养48h时30、3μg/mLHstl组比较除外,其余各Hstl和(或)rhEGF对照组培养48、72h细胞数均显著高于对照组(t值为7.754-24.979,P值均小于0.01)。培养72h,100μg/mEHstl组细胞数为(19,21±0.59)×10^4个,明显高于30μg/mLHstl组的(16.19±0.53)×10^4个及3μg/mLHstl组的(15.38±0.13)×10^4个(t值分别为11.391、19.017,P值均小于0.01);30μg/mLHstl+10ng/mLrhEGF组细胞数高于30、3μg/mLHstl组及10ng/mlJrhEGF组(t值为4.579-34.884,P〈0,05或P〈0.01)。各组细胞数均随培养时间的延长而增加。(2)与对照组培养24、48h比较,100、30μg/mLHstl组G0/G1期细胞百分比降低,S期细胞百分比提高(30μg/mLHstl组与对照组培养24h比较除外),PI值显著提高(t值为4.752-16.104,P值均小于0.01)。3μg/mLttstl组仅住培养48h时PI值较对照组显著增加(t=4.609,P〈0.01)。培养72h,仅100μg/mLHstl组PI值显著高于对照组(t=8.005,P〈0.01)。各Hstl处理组组间比较,各时相点随Hstl浓度降低,G0/G1期细胞百分比呈升高趋势,S期细胞百分比及P1值均呈下降趋势。各Hstl处理组组内比较,随着培养时间的延长,G0/G1期细胞百分比先降低后增加,S期细胞百分比、PI值均先增加后降低。(3)未用丝裂霉素C处理:划痕后16h.30μg/mLHstl组划痕愈合面积百分比为(75.9±3.9)%,显著高于对照组、10ng/mLrhEGF组[(53.0±3.5)%、(61.7±2.5)%,t值分别为12.241、7.598,P值均小于0.01],低于30μg/mLHstl+10μg/mLrhEGF组、15μg/mLHstl+5ng/mLrhEGF组、15μg/mLHstl+10ng/mLrhEGF组f(95.0±4.1)%、(97.0±3.7)%、(80.5±5.9)%,t值为-11.324--2.502,P〈0.05或P〈0.011。丝裂霉素C处理:划痕后16h,30μg/mLHstl组划痕愈合面积百分比为(54.1±4.5)%,高于对照组[(35.8±5.7)%,t=7.790,P〈0.01],但较未用丝裂礞素C处理时叫显下降(t=-10.863,P〈0.01);与其他Hstl和rhEGF联合处理纰相近(t值为0.061-2.030,P值均大于0.05)。未用丝裂霉素X处理时及丝裂霉素c处理后各纰内划痕后24h与16h划痕愈合师积百分比相近(F值为0.856-3.062,P值均大于0.05)。结论Hstl能促进HaCaT细胞增殖和迁移,与rhEGF联合应用时对细胞增殖有协同促进作用,但对细胞迁移无明显协同作用。