摘要:
目的观察P311在小鼠浅Ⅱ发烧伤技体外细胞创伤模型中对表皮干细胞(ESC)辽移的作用并探讨其机制。方法(1)取18只C57BL/6小鼠,其中15只行背部浅Ⅱ度烧伤,于伤后6、12、24、48、72h取创面及创周皮肤组织,各时相点3只;余下3只小鼠作为正常对照,同法取止常皮肤标本。采用生物素-链霉亲和素-过氧化物酶(SP)染色法观察P311在上述皮肤组织中的表达。(2)取6只新生的C57BL/6小鼠,连续3d腹腔注射50μg/g溴脱氧尿苷(BrdU,2次/(1)建立ESC示踪模型。7周后于其背部制作浅Ⅱ度烧伤创面。伤后72h取创面皮肤组织制作连续切片,SP法免疫组织化学染色,观察P311阳性和BrdU阳性细胞空间共定位情况。(3)构建腺病毒空载体pAdEasy-增强型绿色荧光蛋h(EGFP)及P311腺病毒表达载体pAdEasy-EGFP-P311,并进行包装。应用Ⅳ型胶原快速黏附法分离培养人ESC,按照随机数字表法将其分为P311高表达组和EGFP对照组,每组3孔,分别以pAdEasy-EGFP-P311及pAdEasy-EGFP腺病毒感染ESC。2组ESC经丝裂毒素C处理2h后行划痕实验。划痕后0(即刻)、24、48、72h测量地固定范围内划痕剩余面积,计算划痕愈合面积百分比。对数据进行独立样本t检验。结果(1)浅Ⅱ度烧伤后不同时相点,P311在创面不同部位的表达量各不相同。伤后创面毛囊、新生表皮巾P311表达量随时间延长逐渐上升;创用表皮及毛囊的P311表达量于伤后12h达高峰,72h回落至正常。(2)应用BrdU标记的小鼠浅Ⅱ度烧伤创Ⅲ新生表皮层可见P311阳性细胞和BrdU阳性细胞共定位。(3)划痕后48、72h,P311高表达组ESC划痕愈合面积百分比分别为(69±31)%、(89±26)%,明显高于EGFP刘照组[(35±12)%、(46±31)%,t值分别为-2.336、-2,611,P值均小于0.05]。结论P311可明显促进小鼠浅Ⅱ度烧伤创面及体外细胞创伤模型中的ESC迁移,可能在创面修复中起重要作用。