摘要: 目的研究血管内皮生长因子165（VEGF165）琏因对真皮替代物体内血管化的影响。一方法采用含量体积分数10％FBS的M199培养基（简称完全培养基）培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。（1）按随机数字表法将HUVEC分为3组，每组6孔：未转染组，不行转染；空载质粒组，转染pIRES2-增幔型绿色荧光坐h（EGFP）质粒；VEGF质粒组，转染pIRES2-EGFP-血管内皮生长因子（VEGF）质粒。转染后24h，倒置相差荧光显微镜下观察各组细胞中绿色荧光蛋白（GFP）表达情况，流式细胞仪榆测各组细胞pIGFP的表达率；未转染组行相同检测。以新霉素筛选出空载质粒组和VEGF质粒绀稳转细胞进行实验。分别采用实时荧光定髓PCR法和蛋白质印迹法、ELIISA法枪测3组细胞中、VEGF、165mRNA和蛋白表达以及细胞培养上清液中VEGF165的蛋白含量。（2）按随机数字表法将48只雄性裸鼠分为4组，每组12只：生理盐水组，背部两侧（部位下同）埋植经生理盐水培养2d的真皮替代物；培养基组，埋植经完全培养基培养2d的真皮替代物；未转染细胞组，埋植经含未转染HLjVEC的完全培养琏培养2d的真皮棒代物；转染细胞绀，埋植经含VEGF质粒稳转HUVEC的完食培养堪培养2d的真皮替代物。埋植术后3、7、14和21d取出各组真皮替代物，行免疫组织化学染色，观察其上微血管和HUVEC分布，技数术后14d微血管数量；蛋白质印迹法检查真皮替代物中VEGF165蛋白表达。各项检测及观察均重复进行3次，数抓采用单因素方差分析和bD法处理。结果（1）转染后24h，仅红2个转染组细胞中观察到明显绿色荧光。细胞中GFP表达率：未转染绀为0，守载质粒组（85．2±3．2）％，VEGF质粒组（93．1±2．4）％。末转染组、审载质粒组、VEGF质粒组细胞中VEGF 165mRNA相对表达啦分别为1、I．05±0．09、3．02±0．13（F=5．28，P〈0．05），VEGF165蛋白相对表达量分别为0．78±0．16、0．76±0．13、I．92±0．18（F=7．62，P〈0．05）；细胞㈠占液中VEGF165堡白含量分别为（62．4±2．7）、（73．1±3．8）、（117．5±3．1）pg／mL（F=15．08，P〈0．05）。VEGF、质粒组各项指标水甲均显著高于其余2组，P值均小于0．05。、（2）术后14d起转染细胞组真皮替代物中HUVEC明显多于其他3组。术后4d，各组真皮替代物中每200倍视野中微血管数量：生理盐水组（4．2±1，1）个、培养基组（5．2±1．1）个、未转染细胞纰（6．6±0．9）个、转染细胞绀（13．8±0．8）个，4组间比较，著芹有统训学意义，F=17．96，P〈0．01；转染细胞组微血管数明显多于其余3组（P值均小于0．05）。真皮替代物上VEGF165蛋白相对表达量比值：术后7d起，转染细胞组显著高于牛理盐水组（P〈0．05）；术后14、21d术转染细胞组（1．652±0．086、2．152±0．062）与转染细胞组（2．403±0．091、2．879±0．047）均显著高于生理盐水组（1．299±0．027、1．362±0．103，P值均小于0．05），且转染细胞组明娃高于未转染细胞组（P值均小于0．05）。各组真皮铪代物中VEGF165蛋白含量均随术后时间延长而增加。结论VEGF、165基因转染使HUVEC持续高表达VEGF165蛋白，可有效促进真皮棒代物体内血管化。