摘要:
目的了解热刺激对小鼠皮肤KC表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)表达的影响及CAR对树突状表皮T淋巴细胞(DETC)分泌细胞生长因子的作用、,方法(1)取20只BALB/c小鼠,按随机数字表法分为热刺激组和对照组,每组10只。热刺激组小鼠用经100℃热水浸泡约3rain后拧千的湿纱布作用于背部脱毛区l~3s造成不超过I度烫伤的损伤;对照组小鼠川经室温水浸泡后拧f:的湿纱布作用于背部脱毛区l~3S致似伤。留取脱毛J)(中央2.0c-X2.0cn,方形全层皮肤,免疫组织化学染色法观察皮肤组织切片巾CAR的表达,实时荧光定量RT—PCR、蛋白质印迹法分刖测定小鼠皮肤组织r11CAR的mRNA和蛋rI表达水平、(2)取2只BALB/c胎鼠,切取躯f全层皮肤,分离培养KC,按随机数字表法分为热刺激组和对照组,每组设5个复孔,对照组置于常规培养箱中培养1h,热刺激组置于42℃、体积分数5%二氧化碳培养箱巾培养lh,随后均于常规环境中继续培养6h,用流式细胞仪检测KC的凋r二率千¨CAR的表达。(3)取5只BALB/c小鼠断颈处死,切取躯干全层皮肤,分离培养捉纯小鼠DETC,按随机数字表法分为7组,对照组不加任何刺激闪素,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/I.CAR组培养液111添加相应浓度的重组鼠CAR,每组设5个复孔,川EI。ISA法测定胰岛素样生长闪子I(IGF-I)、角质形成细胞生长因子(KGF)浓度。对数据行独立样本t检验和单『太l素方差分析。结果(1)免疫组织化学染色显示对照组小鼠皮肤组织切片有轻度阳性染色,热刺激组小鼠皮肤组织切片阳性染色明显加深,均主要集中在表皮KC、毛囊、汗腺k皮细胞上,FI,未见阳性染色。对照组和热刺激组小鼠皮肤组织中CAR的mRNA表达水平分别为0.157±0.027和0.773±0.029,二者比较差异有统计学意义(f:3.052,P〈0.01);CAR的蛋白表达水平分别为0.23±0.09和0.89±0.14,二者比较差异有统计学意义(t:2.556,P〈0.05)。。(2)对照组和热刺激组小鼠KC凋广率分别为(5.7±1.3)%和(7.4±1.7)%,二者比较差异无统计学意义(£=0.464,P〉0.05);KC表丽CAR的表达率分别为(48±6)%和(80±8)%,二者比较差异有统计学意义(t:2.585,P〈0.05)。、(3)对照组DETC培养上清液叶1IGF—I浓度为(23.1±1.8)斗g/L,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/I。CAR组DETC培养k清液中IGF—I浓度分别为(22.5±2.1)、(31.2±2.5)、(39.7±2.3)、(61.8±3.5)、(45.1±2.8)、(29.0±2.0)tLg/L,组间总体比较差异有统计学意义(F:3.414,P〈0.05)。对照组DETC培养上清液中KGF浓度为(131±9)ng/I.-,0.5、I.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/L.CAR纰KGF浓度分别为(217±12)、(355±21)、(5634-21)、(535±34)、(292±20)、(245±10)ng/I。,组问总体比较差异何统计学意义(F=5.063,P〈0.01)。结论热刺激后小鼠皮肤KC表面CAR表达上调,且CAR促进DETC分泌IGF-I、KGF的最佳浓度较低。