摘要: 目的探讨微小RNA．21对缺血缺氧所致大鼠心肌细胞凋产的影响，并分析其可能的作用机制。方法（I）取大鼠心肌细胞株H9C2加入低糖无血清DMEM培养液模拟缺血环境，将细胞镫于气体成分为体积分数l％氧气、5％二氧化碳和94％氮气的i气培养箱中进行缺氧培养。实时荧光定量RT—PCR检测正常心肌细胞和缺血缺氧刺激6、24h心肌细胞中微小RNA-21的表达。（2）另取心肌细胞株H9C2按随机数字表法分为4组。正常对照组：不进行任何处理，常规培养；单纯缺咀缺氧组：行单纯缺血缺氧处理24h；阴性转染＋缺血缺氧组：转染微小RNA模拟物阴性对照24h后，给予缺血缺氧处理24h；微小RNA-2l＋缺血缺氧组：转染微小RNA-2l模拟物24h后，给予缺虹缺氧处理24h。后3组均于处理完毕后立即进行如下检测，正常对照组于同时相点收集细胞进行检测。流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率；实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别测定心肌细胞程序性细胞死亡因子4（PDCD4）的mRNA和蛋白表达水平。本实验样本数为6或3。对数据行单因素方差分析和LSD-t检验。结果（1）正常心肌细胞和缺血缺氧刺激6、24h心肌细胞微小RNA-2l的相对表达量分别为1．09±0．17、0．75±0．08、0．67±0．08（F=11．280，P=0．009）。与正常心肌细胞比较，缺血缺氧处理24（t=4．461，P=0．004）、6h（t=3．642，P=0．011）的心肌细胞中微小RNA-21表达均下渊，且前者更明最。故后续实验细胞缺血缺氧处理均为24h。（2）正常对照组心肌细胞凋亡率为（3．5±0．7）％。缺血缺氧处理24h，单纯缺血缺氧组、阴性转染＋缺血缺氧组及微小RNA-21＋缺血缺氧组心肌细胞凋亡率分别为（17．3±3．2）％、（16．4±3．0）％、（7．6±2．0）％（F=15．176，P=0．001）。与正常对照组比较，单纯缺虹缺氧组心肌细胞凋亡率明显升高（t=5．64l，P〈0．001）；与阴性转染＋缺血缺氧组比较，微小RNA．2l＋缺血缺氧组心肌细胞凋亡率明鼎下降（t=3．588．P=0．007）。正常对照组心肌细胞PDCD4的mRNA相对表达量为1．06±0．21。缺血缺氧处理24h，单纯缺m缺氧组、阴性转染＋缺血缺氧组及微小RNA．21＋缺血缺氧组PDCD4的mRNA相对表达量分别为3．01±0．34、3。05±0，25、1．48±0．24（F=44．952，P〈0．001）。与正常对照组比较，单纯缺血缺氧组PDCD4的mRNA表达明碌上调（t=8．945，P〈0．001）；与阴性转染＋缺血缺氧组比较，微小RNA-21＋缺血缺氧组PDCD4的mRNA表达明最降低（t=7．253，P〈0．001）。正常对照组PDCD4的蛋白相对表达量为0．44±0．08。缺血缺氧处理24h，单纯缺血缺氧组、阴性转染＋缺血缺氧绀及微小RNA-21＋缺血缺氧组PDCD4的蛋白相对表达量分别为0．96±0．13、1．05±0.12、0．58±0．12（F=18．804，P=0．008）。与正常对照组比较，单纯缺血缺氧组PDCD4的蛋白表达明显上调（，=5．429，P=0．006）；与阴性转染＋缺血缺氧组比较，微小RNA-21＋缺血缺氧组PDCD4的蛋白表达明冠降低（t=4．903，P=0．008）。结论缺帆缺氧刺激使心肌细胞微小RNA-21水平降低，提高细胞微小RNA-2l水平可减轻缺血缺氧所致心肌细胞凋亡，其抗凋亡作用可能是通过降低细胞PDCD4表达而实现的。