摘要: 目的 观察大鼠严重烧伤后及肺微血管内皮细胞(PMVEC)经烧伤血清刺激后活性氧水平,探讨活性氧与PMVEC凋亡的关系. 方法 (1)取24只SD大鼠按随机数字表法(分组方法下同)分为假伤组3只、烧伤组21只,烧伤组大鼠背部造成30％ TBSAⅢ度烫伤,假伤组大鼠致假伤.伤后6、12、24、36、48、60、72 h按随机数字表法分别取3只烧伤组大鼠,腹主动脉取血,ELISA法检测血清中活性氧含量;假伤组大鼠行相同检测.(2)取5只SD大鼠按前述方法造成烫伤,伤后24 h制备烧伤大鼠血清;另取5只SD大鼠不作处理,制备健康大鼠血清.(3)切取20只SD大鼠幼鼠肺外边缘组织,组织块法培养细胞,免疫组织化学法鉴定细胞.取第3代对数生长期PMVEC分别接种于6孔板和12孔板,均分为4组(每组设3个复孔):正常血清组、烧伤血清组,无血清内皮细胞专用培养液中分别加入体积分数15％健康大鼠血清、体积分数15％烧伤大鼠血清培养;正常血清+锰四(4-苯甲酸)卟啉(MnTBAP)组、烧伤血清+MnTBAP组,在前2组的基础上再分别加入100 μmol/L MnTBAP培养.培养24 h后,流式细胞仪检测6孔板中细胞内活性氧含量,吖啶橙-溴化乙啶染色观察12孔板中细胞凋亡情况并计算凋亡率.对数据行单因素方差分析、LSD-t检验. 结果 (1)烧伤组大鼠伤后24、36、48、60、72 h血清中活性氧含量分别为(187 ±21)、(235 ±22)、(231 ±25)、(291 ±20)、(315±23) nmol/mL,显著高于假伤组的(141±19) nmol/mL(t值分别为7.86、9.57、13.87、14.98、18.40,P值均小于0.01).(2)原代培养细胞生长较慢,呈铺路石样生长;传代后细胞呈均匀分布生长.细胞凝血因子Ⅷ阳性表达率为(96±5)％,鉴定为PMVEC.(3)培养24 h后,正常血清组、烧伤血清组、正常血清+ MnTBAP组、烧伤血清+MnTBAP组PMVEC中活性氧含量分别为798±40、1 294±84、763±59、926 ±42(F=93.01,P＜0.01),细胞凋亡率分别为(6.2±1.3)％、(57.3±6.7)％、(3.7±0.8)％、(28.7±5.7)％(F=224.50,P＜0.01).与正常血清组比较,烧伤血清组PMVEC中活性氧含量、细胞凋亡率明显增加(t值分别为10.40、49.06,P值均小于0.01);烧伤血清+MnTBAP组PMVEC中活性氧含量、细胞凋亡率较烧伤血清组明显减少(t值分别为7.48、23.94,P值均小于0.01). 结论 大鼠严重烧伤后血清中活性氧上升,烧伤大鼠血清刺激PMVEC可以导致细胞内活性氧以及细胞凋亡增加,应用MnTBAP清除活性氧可减少烧伤大鼠血清诱导的细胞凋亡。