摘要:
目的了解高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响及其受体机制。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,在巨噬细胞中加入不同的刺激物,分为HMGB1组:加入10μg/ml的HMGB1;HMGB1+抗晚期糖基化终末产物受体(RAGE)组:先加入RAGE多克隆抗体5μg/ml孵育2h后,再加入HMGB1;HMGB1+重组鼠(rm)RAGE/Fc组:将10μg/ml的HMGB1与10μg/ml的rmRAGE/Fc混合作用2h后,再加入巨噬细胞;对照组:加入磷酸盐缓冲液。采用流式细胞仪检测细胞表面RAGE的表达强度。激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果HMGB1组RAGE阳性细胞率(54±12)%明显高于对照组[(13±5)%,P〈0.01],其荧光强度(126±10)也显著高于对照组(34±8,P〈0.01)。HMGB1+rmRAGE/Fc组、HMGB1+抗RAGE组凋亡细胞明显多于对照组,而HMGB1组晚期凋亡及坏死细胞明显多于其他3组。HMGB1组细胞凋亡率(39.5±2.3)%高于HMGB1+rmRAGE/Fc组[(17.3±3.6)%]、HMGB1+抗RAGE组[(14.8±4.8)%]及对照组[(5.4±2.3)%,P〈0.01]。结论HMGB1可诱导RAGE表达上调,RAGE是HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的主要受体之一。