胰高血糖素样多肽2受体上调表达的Caco2细胞株克隆转染与筛选鉴定
Transfection and identification of the cloned strain that stably expressing glucagon like peptide-2 receptor in Caco2 cell lines
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摘要: 目的建立胰高血糖素样多肽2受体(glucagon like peptide-2 receptor,GLP-2R)上调表达的Caco2细胞株,为研究GLP-2肠道保护机制构建体外模型。方法常规扩增抽提GLP-2R/pcDNA3.1质粒,经酶切、测序鉴定正确后,用脂质体转染法将其转染至Caco2细胞。G418抗性筛选,挑选耐药细胞克隆培养获得稳定细胞株。以HER293细胞、VE细胞、正常Caco2细胞及正常人小肠组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应与蛋白质印迹法检测稳定转染细胞中mRNA及其蛋白的表达。结果扩增抽提GLP-2R/pcDNA3.1质粒后经酶切、测序结果正确。GLP-2R mRNA及其蛋白在HER293细胞及VE细胞中无表达,在正常Caco2细胞中表达微弱,在人小肠组织中有较强表达;转染GLP-2R后,Caco2/GLP-2R(+)细胞中GLP-2R mRNA及其蛋白表达明显增强。结论GLP-2R分布具有相对特异性,正常Caco2细胞中GLP-2R表达较弱;构建的caco2/GLP-2R(+)细胞模型成立,为深入研究GLP-2的作用机制奠定了良好基础。
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关键词:
- 真核细胞 /
- 转染 /
- 克隆细胞 /
- 基因 /
- 胰高血糖素样多肽2受体
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Key words:
- Eukaryotic cells /
- Transfection /
- Clone cells /
- Genes /
- Glucagon like peptide-2 receptor
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