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白细胞介素6对人脐静脉血管内皮细胞-间质细胞转化的作用

郭玲 何静 崔莉 米俊伟 张蜀 孙剑会 杜娟 文大林 张华才 蒋建新 王建民 黄宏

郭玲, 何静, 崔莉, 等. 白细胞介素6对人脐静脉血管内皮细胞-间质细胞转化的作用[J]. 中华烧伤杂志, 2021, 37(5): 420-428. DOI: 10.3760/cma.j.cn.501120-20201215-00530
引用本文: 郭玲, 何静, 崔莉, 等. 白细胞介素6对人脐静脉血管内皮细胞-间质细胞转化的作用[J]. 中华烧伤杂志, 2021, 37(5): 420-428. DOI: 10.3760/cma.j.cn.501120-20201215-00530
Guo Ling, He Jing, Cui Li, et al. Role of interleukin-6 in human umbilical vein endothelial cell to mesenchymal cell transformation[J]. Chin j Burns, 2021, 37(5): 420-428. DOI: 10.3760/cma.j.cn.501120-20201215-00530
Citation: Guo Ling, He Jing, Cui Li, et al. Role of interleukin-6 in human umbilical vein endothelial cell to mesenchymal cell transformation[J]. Chin j Burns, 2021, 37(5): 420-428. DOI: 10.3760/cma.j.cn.501120-20201215-00530

白细胞介素6对人脐静脉血管内皮细胞-间质细胞转化的作用

doi: 10.3760/cma.j.cn.501120-20201215-00530
基金项目: 

重庆市院士牵头科技创新引导专项 (cstc2017zdcy-yszxX0002)

国家自然科学基金面上项目 (81571912,30871025)

Role of interleukin-6 in human umbilical vein endothelial cell to mesenchymal cell transformation

  • 摘要:

    目的 观察白细胞介素6(IL-6)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表型和功能的影响,探索IL-6在内皮-间充质转化(EndMT)过程中的作用。 方法 采用实验研究方法。取产妇行分娩手术后弃用的新鲜正常胎儿脐带,分离培养原代细胞的第2天在倒置相差显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法鉴定第4代细胞是否为HUVEC后,取2批第3~5代HUVEC,用于后续实验。将第1批细胞按随机数字表法(下同)分为6组:空白对照组、5 ng/mL IL-6组、10 ng/mL IL-6组、25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组、100 ng/mL IL-6组,将第2批细胞分为4组:空白对照组、10 ng/mL IL-6组、25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组;空白对照组仅加入完全培养液,其余各组细胞还加入相应终质量浓度的IL-6。第1批细胞,分组培养后72 h,倒置相差显微镜下观察6组HUVEC形态;免疫荧光法检测6组HUVEC凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的阳性表达,并计算双阳性细胞数占凝血因子Ⅷ阳性细胞数的比值(以下简称双阳性细胞数的比值),样本数为6;实时荧光定量反转录PCR法检测6组HUVEC 血管内皮钙黏蛋白和α-SMA蛋白的mRNA表达量,样本数为3。第2批细胞,分组培养后72 h,蛋白质印迹法检测4组HUVEC 血管内皮钙黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型胶原的蛋白表达量,样本数为3。对数据行单因素方差分析、Bonferroni校正。 结果 原代分离培养的第2天细胞呈短梭形或多边形,免疫荧光法鉴定第4代细胞为HUVEC。第1批细胞,分组培养后72 h,6组细胞随IL-6浓度的逐渐增加,其形态向长梭形变化,细胞间连接减少或消失、间隙变大。分组培养后72 h,与空白对照组双阳性细胞数的比值相比,25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组、100 ng/mL IL-6组显著增高(

    P

    <0.01);与5 ng/mL IL-6组双阳性细胞数的比值相比,25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组和100 ng/mL IL-6组显著升高(

    P<

    0.01);与10 ng/mL IL-6组双阳性细胞数的比值相比,50 ng/mL IL-6组和100 ng/mL IL-6组显著升高(

    P

    <0.01);100 ng/mL IL-6组双阳性细胞数的比值均显著高于25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组(

    P

    <0.01)。分组培养后72 h,与空白对照组细胞血管内皮钙黏蛋白的mRNA表达量比,25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组和100 ng/mL IL-6组明显下降(

    P

    <0.05或

    P

    <0.01);与5 ng/mL IL-6组细胞血管内皮钙黏蛋白的mRNA表达量比较,50 ng/mL IL-6组和100 ng/mL IL-6组均明显下降(

    P

    <0.01);与10 ng/mL IL-6组细胞血管内皮钙黏蛋白的mRNA表达量比较,50 ng/mL IL-6组和100 ng/mL IL-6组明显下降(

    P

    <0.01);与25 ng/mL IL-6组细胞血管内皮钙黏蛋白mRNA的表达量比较,50 ng/mL IL-6组和100 ng/mL IL-6组明显下降(

    P

    <0.01)。分组培养后72 h,5 ng/mL IL-6组、10 ng/mL IL-6组、25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组、100 ng/mL IL-6组细胞 α-SMA的 mRNA表达水平显著高于空白对照组(

    P

    <0.05或

    P

    <0.01)。第2批细胞分组培养后72 h,与空白对照组细胞血管内皮钙黏蛋白的蛋白表达量1.391±0.026比较,10 ng/mL IL-6组(1.185±0.063)、25 ng/mL IL-6组(0.717±0.078)、50 ng/mL IL-6组(0.293±0.064)显著降低(

    P

    <0.05);与10 ng/mL IL-6组细胞血管内皮钙黏蛋白的蛋白表达量比较,25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组显著降低(

    P

    <0.01);与25 ng/mL IL-6组细胞血管内皮钙黏蛋白的蛋白表达量比较,50 ng/mL IL-6组显著降低(

    P

    <0.01)。分组培养后72 h,与空白对照组细胞α-SMA的蛋白表达量比较,10 ng/mL IL-6组、25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组显著升高(

    P

    <0.01);与10 ng/mL IL-6组细胞α-SMA的蛋白表达量比较,25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组显著增加(

    P

    <0.01)。分组培养后72 h,与空白对照组细胞Ⅰ型胶原的蛋白表达量比较,25 ng/mL IL-6组、50 ng/mL IL-6组显著增加(

    P

    <0.05)。 结论 IL-6作用于HUVEC后,细胞的表型和功能呈浓度依赖性表现为间质细胞的特征。炎症因子可促进EndMT进程,成为调控组织纤维化机制的重要因子之一。

     

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出版历程
  • 收稿日期:  2020-12-15
  • 网络出版日期:  2021-10-28
  • 刊出日期:  2021-05-20

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