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改性纳米生物玻璃水凝胶的制备及特性初步研究

韦丽春 张熠杰 黄沙 姚斌 李想 陈旭源 黎彦 付小兵 吴旭

韦丽春, 张熠杰, 黄沙, 等. 改性纳米生物玻璃水凝胶的制备及特性初步研究[J]. 中华烧伤杂志, 2020, 36(10): 930-938. Doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190806-00337
引用本文: 韦丽春, 张熠杰, 黄沙, 等. 改性纳米生物玻璃水凝胶的制备及特性初步研究[J]. 中华烧伤杂志, 2020, 36(10): 930-938. Doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190806-00337
Wei Lichun, Zhang Yijie, Huang Sha, et al. Preparation and preliminary research on the characteristics of modified nano-bioglass hydrogel[J]. Chin j Burns, 2020, 36(10): 930-938. Doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190806-00337
Citation: Wei Lichun, Zhang Yijie, Huang Sha, et al. Preparation and preliminary research on the characteristics of modified nano-bioglass hydrogel[J]. Chin j Burns, 2020, 36(10): 930-938. Doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190806-00337

改性纳米生物玻璃水凝胶的制备及特性初步研究

doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20190806-00337
基金项目: 

国家重点研究发展规划 (2017YFC1103300)

解放军总医院杰出青年培育专项 (2017-JQPY-002)

军队后勤科研重大项目 (AWS17J005)

国家自然科学基金 (81571909、81701906、81830064、81721092、81671905)

Preparation and preliminary research on the characteristics of modified nano-bioglass hydrogel

  • 摘要: 目的 初步探讨改性纳米生物玻璃水凝胶的制备以及它的理化、生物学特性。 方法 (1)取400 mL氢氧化钙饱和溶液,加入纳米二氧化硅悬液67 mL,制备纳米生物玻璃悬液,观察其悬浮稳定性。(2)制备终质量分数为10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶,设为对照组;在对照组水凝胶基础上加入实验(1)制备的纳米生物玻璃悬液,制备终质量分数为0.5%生物玻璃、10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶,设为实验组。观察2组水凝胶在4、25 ℃的成胶情况并记录成胶时间及在37 ℃的熔解情况并记录熔胶时间。另取2组水凝胶,4 ℃冷浴后用25 g/L的氯化钙溶液交联,用杨氏模量测定仪测量压缩模量。另取2组水凝胶,同前交联后于-20 ℃冻干,测量相关体积并计算孔隙率。样本数均为3。(3)取12只24 h龄C57BL/6J小鼠乳鼠,分离培养成纤维细胞(Fb),倒置显微镜下观察其形态,并培养第3代Fb,用于后续实验。取Fb,制备细胞浓度为1×105个/mL的单细胞悬液,按随机数字表法(下同)分为实验组和对照组,分别加入实验(2)制备的实验组和对照组液态水凝胶,培养12、24、48 h,每组各取3孔,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率。(4)取第3代Fb,制备细胞浓度为(3.0~4.5)×107个/mL的单细胞悬液,分为实验组和对照组,每组1管,加入绿色荧光探针DIO染色,分别加入实验(2)中制备的实验组和对照组液态水凝胶9 mL,同前交联后制备载细胞水凝胶。培养3 d,激光共聚焦显微镜下观察细胞在凝胶中的存活情况;同前制备载细胞水凝胶块但不加绿色荧光探针DIO,培养7 d,在扫描电子显微镜下观察细胞在水凝胶中的黏附及伸展情况。(5)取6周龄雌性BALB/c-nu裸鼠12只,分为实验组和对照组,每组6只,在背部制作直径为1 cm的圆形全层皮肤缺损创面,伤后即刻,分别放入1块实验(4)制备的实验组和对照组载细胞水凝胶块。伤后7、14 d,每组取3只裸鼠,收集创面及创周组织,苏木精-伊红染色,观察创面愈合情况。对数据行独立样本t检验。 结果 (1)纳米生物玻璃粒子可在水中均匀分散,具有良好的悬浮稳定性。(2)2组水凝胶在37 ℃下均呈熔融状态,均未见粒子析出。实验组和对照组水凝胶在37 ℃下的熔胶时间分别为5、10 min,在25 ℃下成胶时间分别为30、180 min,在4 ℃下成胶时间分别为5、10 min。实验组水凝胶压缩模量为(53±6)kPa,明显高于对照组的(23±6)kPa(t=6.364,P<0.01)。实验组水凝胶孔隙率为(86.1±2.1)%,与对照组的(88.2±4.4)%相近(t=1.210,P>0.05)。(3)细胞呈长梭形,细胞核所占比例较大,符合Fb形态学特征。培养12、24、48 h,实验组细胞存活率为(84±4)%、(89±4)%、(130±10)%,与对照组的(89±5)%、(90±4)%和(130±11)%相近(t=1.534、0.611、0.148,P>0.05)。(4)培养3 d,2组细胞在水凝胶中形态完整,未见细胞核裂解、消失,细胞质保持完好,并且实验组细胞荧光强度明显强于对照组。培养7 d,实验组和对照组细胞在水凝胶中黏附、伸展,且实验组细胞在水凝胶中黏附数明显多于对照组。(5)伤后7 d,对照组、实验组裸鼠创面面积均缩小,且实验组减小更明显,2组裸鼠创面及创周均可见大量炎症细胞分布。伤后14 d,对照组裸鼠创面面积大于实验组,且创面及创周炎症细胞明显多于实验组。 结论 纳米生物玻璃水凝胶具有良好的理化、生物学特性和载细胞潜能,同时还具有促创面愈合能力,在临床应用方面有着较好的潜力。

     

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出版历程
  • 收稿日期:  2019-08-06
  • 网络出版日期:  2021-10-28
  • 刊出日期:  2020-10-20

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