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P311对人微血管内皮细胞1体外血管形成能力的影响及其分子机制

王淞 李海胜 钱卫 张小容 贺伟峰 罗高兴

周克强, 苏映军, 贾赤宇. 使用牛分枝杆菌减毒株建立大鼠结核性创面模型的可靠性探究[J]. 中华烧伤杂志, 2021, 37(8): 793-796. DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20200531-00290.
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Citation: Wang S,Li HS,Qian W,et al.Effects of P311 on the angiogenesis ability of human microvascular endothelial cell 1 in vitro and its molecular mechanism[J].Chin J Burns Wounds,2022,38(2):119-129.DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20211210-00410.

P311对人微血管内皮细胞1体外血管形成能力的影响及其分子机制

doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20211210-00410
基金项目: 

国家自然科学基金重点项目 81630055

国家自然科学基金青年科学基金项目 82102340

湖北省自然科学基金 2020CFB210

详细信息
    通讯作者:

    罗高兴,Email:logxw@yahoo.com

Effects of P311 on the angiogenesis ability of human microvascular endothelial cell 1 in vitro and its molecular mechanism

Funds: 

Key Program of National Natural Science Foundation of China 81630055

Youth Science Foundation Project of National Natural Science Foundation of China 82102340

Hubei Provincial Natural Science Foundation 2020CFB210

More Information
    Corresponding author: Luo Gaoxing, Email: logxw@yahoo.com
  • 摘要:       目的     探讨P311对人微血管内皮细胞1(HMEC-1)血管形成能力的影响及其可能的分子机制。      方法     采用实验研究方法。取HMEC-1,按随机数字表法(分组方法下同)分为P311腺病毒组和空载腺病毒组,分别进行48 h相应转染后,采用细胞计数试剂盒8法检测培养1、3、5 d细胞增殖活性;划痕试验检测细胞划痕后6、11 h剩余划痕面积,并计算剩余划痕面积百分比;体外血管形成实验观察细胞培养8 h血管形成情况,并测量管状结构节点数和总长度;蛋白质印迹法检测细胞中血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、磷酸化VEGFR2、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化ERK1/2蛋白表达量。取HMEC-1,分为P311腺病毒+阴性对照小干扰RNA(siRNA)组、空载腺病毒+阴性对照siRNA组、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组和空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组,分别进行相应的处理,蛋白质印迹法检测转染24 h细胞中VEGFR2、磷酸化VEGFR2、ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量;体外血管形成实验观察转染24 h细胞血管形成情况,并测量管状结构节点数和总长度。取HMEC-1,分为P311腺病毒+二甲基亚砜(DMSO)组、空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组和空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组,分别进行相应的处理。蛋白质印迹法检测处理2 h细胞中ERK1/2及磷酸化ERK1/2蛋白表达量;体外血管形成实验观察处理2 h细胞血管形成情况,并测量管状结构节点数和总长度。各组各时间点样本数均为6。对数据行独立样本t检验、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验。      结果     与空载腺病毒组比较,P311腺病毒组细胞培养1、3、5 d增殖活性均没有明显改变(t值分别为-0.23、-1.30、-1.52,P>0.05)。P311腺病毒组细胞划痕后6、11 h剩余划痕面积百分比均较空载腺病毒组明显降低(t值分别为-2.47、-2.62,P<0.05)。培养8 h,与空载腺病毒组比较,P311腺病毒组细胞管状结构节点数和总长度均明显增加(t值分别为4.49、4.78,P<0.01)。转染48 h,与空载腺病毒组比较,P311腺病毒组细胞VEGFR2、ERK1/2蛋白表达量均无明显变化(P>0.05),磷酸化VEGFR2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显升高(t值分别为17.27、16.08,P<0.01)。转染24 h,P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞磷酸化VEGFR2和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于空载腺病毒+阴性对照siRNA组(P<0.01),P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞VEGFR2、磷酸化VEGFR2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组(P<0.01),空载腺病毒+阴性对照siRNA组细胞VEGFR2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组(P<0.05或P<0.01)。转染24 h,P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞管状结构节点数为(720±62)个,明显多于空载腺病毒+阴性对照siRNA组的(428±38)个、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组的(364±57)个(P值均<0.01);P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞管状结构总长度为(21 241±1 139)μm,明显长于空载腺病毒+阴性对照siRNA组的(17 005±1 156)μm、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组的(13 494±2 465)μm(P值均<0.01)。空载腺病毒+阴性对照siRNA组细胞管状结构节点数明显多于空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组的(310±75)个(P<0.01),管状结构总长度明显长于空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组的(11 600±2 776)μm(P<0.01)。处理2 h,P311腺病毒+DMSO组细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达量明显高于空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组(P值均<0.01),空载腺病毒+DMSO组细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达量明显高于空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组(P<0.05)。处理2 h,P311腺病毒+DMSO组细胞管状结构节点数为(726±72)个,明显多于空载腺病毒+DMSO组的(421±39)个、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组的(365±41)个(P值均<0.01);P311腺病毒+DMSO组细胞管状结构总长度为(20 318±1 433)μm,明显长于空载腺病毒+DMSO组的(16 846±1 464)μm、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组的(15 114±1 950)μm(P值均<0.01)。空载腺病毒+DMSO组管状结构节点数明显多于空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组的(317±67)个(P<0.01),管状结构总长度明显长于空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组的(13 188±2 306)μm(P<0.01)。      结论     P311能够通过激活VEGFR2/ERK1/2信号通路发挥促进HMEC-1血管形成的作用。

     

  • 结核病是全世界十大死亡病因之一1。我国报告的肺外结核占结核病总数的5%2。在肺外结核中,约50%以上患者伴病灶周围软组织的损害,这些损害最终破溃形成“结核性创面”3。结核性创面具有多变的临床表现,仍是发展中国家常见的皮肤病之一4。结核性创面发病早期因临床表现缺乏特异性,因此该类患者常延迟就诊5;加之创面细菌培养阳性率低,造成了较高的漏诊率及误诊率6;创面常伴潜行的皮下隧道,对治疗造成了一定的困难3。目前结核性创面的发病机制尚不清楚,同时缺乏特效的治疗手段7, 8,与目前没有成熟的动物模型有关。因此,对动物模型的研究显得尤为重要。为了给深入研究结核性创面提供稳定可行的动物模型,本课题组使用牛分枝杆菌减毒株(BCG)对SD大鼠进行了结核性创面模型的构建并取得初步结果。

    本实验研究遵循山西医科大学和国家有关实验动物管理和使用的相关规定。

    15只健康无特殊病原体(SPF)级6周龄雄性SD大鼠,体重(200±20)g,由山西医科大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(晋)2015-0001。BCG购于美国ATCC菌株保存中心,Middlebrook OADC增菌液、Middlebrook 7H9培养基购于美国BD公司,弗氏完全佐剂购于美国Sigma公司,石碳酸品红染液、亚甲蓝复染液、苏木精染液购于北京索莱宝生物科技有限公司,伊红购于西亚化学科技(山东)有限公司。EclipseCi-L型光学显微镜购于日本尼康仪器有限公司。

    将-80 ℃冻存的BCG置于冰上,在室温中消融。在生物安全柜中将BCG加入预先添加OADC增菌液的7H9培养液中,置于37 ℃恒温摇床(转速80次/min)培养至菌落形成,通过测菌液吸光度值9的方法计数细菌浓度,分装成浓度为1×107CFU/mL BCG菌液备用。

    将15只大鼠在适宜洁净的饲养间适应性饲养3周,按照随机数字表法分为感染组(12只)和正常对照组(3只)。感染组大鼠背部皮下隧道样注射弗氏完全佐剂0.2 mL,3周后皮下注射BCG菌液0.2 mL,建立大鼠结核性创面模型。正常对照组大鼠未经任何处理。

    1.4.1   大体观察

    分别于感染第8、15、32、43天,大体观察感染组大鼠注射部位皮肤情况并拍照。

    1.4.2   局部组织情况

    分别于感染第8、15、32、43天大体观察后,用颈椎脱臼法处死感染组3只大鼠,取注射部位皮肤组织,体积分数10%甲醛固定24 h后进行包埋。正常对照组正常喂养3周后同前处死,取对应组织进行固定包埋(方法同前)。取正常对照组及感染组大鼠各时间点石蜡组织进行切片(厚度约4 μm),行常规HE染色,400倍光学显微镜下观察细胞排列、坏死及炎症等情况。取感染第43天感染组大鼠石蜡组织同前进行切片,石碳酸品红染液室温染色30 min,冲洗至液体呈无色。滴加亚甲蓝复染液,室温染色1 min,冲洗至液体呈无色。行常规脱水、透明、封片,于600倍和1 000倍光学显微镜下观察组织中细菌分布情况。

    感染组大鼠感染第8天,可见注射部位皮肤稍隆起、皮下形成脓肿,见图1A。随着感染时间的延长,脓肿物体积逐渐增大。感染第15天,注射部位皮肤明显隆起、皮下脓肿较感染第8天时明显增大,见图1B。感染第32天,注射部位隆起的脓肿出现破溃、脓肿表面呈火山口样外观,破溃处可见脓性分泌物,见图1C。感染第43天,脓肿破溃处无愈合倾向,脓肿较感染第32天增大,见图1D。感染第43天时完整切除脓肿,挤压脓肿物可见长条形类似乳酪状脓性分泌物由皮肤破溃处溢出,见图1E, 1H

    1  感染组大鼠感染不同时间点注射部位皮肤组织形成的病灶表现。1A.感染第8天,注射部位皮肤稍隆起(→);1B.感染第15天,注射部位皮下脓肿较图1A明显(→);1C.感染第32天,注射部位隆起的脓肿出现破溃;1D.感染第43天,脓肿破溃处无愈合倾向;1E~1H.感染第43天,创面脓性分泌物经挤压由感染灶内不断溢出的过程

    正常大鼠皮肤组织细胞排列规律,未见炎症细胞浸润,见图2A。感染组大鼠感染第8天,可见细胞分布杂乱、大量聚集、细胞核呈融合趋势,见图2B。感染第15天,可见肉芽肿形成、炎症细胞呈同心圆状排列,见图2C。感染第32天,肉芽肿数量增多,在细菌聚集区域可见大量细胞被破坏,见图2D。感染第43天,细胞排列疏松,部分细胞坏死,见图2E。对感染第43天的组织行抗酸染色,可见组织内存在大量细菌,细菌在组织内呈团簇样聚集(图3A),高倍镜下可以看到大量呈杆状的细菌菌体聚集在病灶中(图3B)。

    2  感染组大鼠感染不同时间点注射部位皮肤组织与正常对照组大鼠对应皮肤组织形态学观察 苏木精-伊红×400。2A.正常对照组大鼠组织细胞排列规律;2B.感染组大鼠感染第8天,细胞分布杂乱、细胞大量聚集;2C.感染组大鼠感染第15天,可见肉芽肿形成(→);2D.感染组大鼠感染第32天,肉芽肿数量增多(→);2E.感染组大鼠感染第43天,细胞排列疏松,部分细胞坏死(→)
    3  感染组大鼠感染第43天注射部位皮肤组织抗酸染色结果。3A.细菌(红色)在组织内呈团簇样聚集 石碳酸品红×600;3B.大量呈杆状的细菌菌体聚集在病灶中 石碳酸品红×1 000

    早期,研究者为了寻找实验条件有限时肺结核研究的替代模型,使用结核杆菌建立了动物皮肤液化和坏死模型10, 11。随着临床对结核性创面的重视,目前研究的皮肤结核动物有兔子、小鼠、大鼠、斑马鱼、猴等12, 13, 14, 15, 16,本研究团队也针对结核性创面进行了动物实验的探索12, 13, 14。Zhang等17使用兔模型评价了不同分枝杆菌的毒力,BCG活菌较H37Ra或耻垢分枝杆菌活菌诱导的病灶面积明显扩大,经过灭活的BCG依然比灭活的H37Ra或耻垢分枝杆菌诱导肉芽肿更明显。兔体型较大、需占用大量饲养空间、实验操作不方便,斑马鱼虽然饲养方便但形成创面所需时间较长。高剂量BCG活菌(5×106 CFU)可引起兔皮肤组织液化和溃疡18,中剂量BCG活菌(5×104 CFU)可诱发兔皮肤组织形成肉芽肿17。本研究既要使大鼠皮肤形成破溃,又要探索使用较低的接种浓度保障安全性,故选用了2×106 CFU的接种量,更低的接种浓度能否引起大鼠皮肤破溃还需要进一步研究。BCG活菌引起兔皮肤结核在11 d左右达到高峰并形成液化19,经灭活的BCG引起的兔皮肤结核在35 d后病变缓慢消退并愈合17,有研究将42 d20或56 d21作为动物皮肤结核取材的最长时间,而海分枝杆菌引起斑马鱼结核创面形成的平均时间为59 d14。本研究最长的观察时间为感染后第43天,未观察到自愈倾向,更长时间的观察有待于进一步研究。

    因结核杆菌标准毒株H37Rv对实验条件要求较高,更多研究者选择BCG作为动物实验1822和细胞实验23中模拟结核菌感染的病原体,使用低毒性的BCG可以最大限度地保障实验环境及人员的安全。大鼠饲养方便,容易获得,实验试剂供应充足,大小适中便于实验操作和观察。本研究团队前期使用BCG活菌成功建立了大鼠皮肤结核模型13,证实使用大鼠作为结核创面模型的可行性,在此基础上进行了多次建模实验,每只大鼠均可稳定地形成局部脓肿并最终破溃。前期研究显示BCG菌(1×107CFU)引起的大鼠结核创面在感染第15天仍有局部红肿13,提示局部红肿的急性炎症表现可能与接种菌量较大有关,为了建立更接近于临床的慢性结核性创面模型,本研究使用较低的接种剂量(2×106 CFU)和隧道样注射方法,在第32天可以形成结核性创面破溃表现。该方法更容易形成局部脓肿、局部炎症反应轻,更符合慢性病灶的特点。该动物模型外观符合结核性创面的临床表现,感染第8天可见注射部位皮下脓肿形成、脓腔内可见黄绿色的黏稠脓液;感染第15天皮下脓肿较前明显增大;感染第32天脓肿出现破溃,破溃后脓肿断层剖面可见皮下形成脓性隧道与外界相通;感染第43天,脓肿破溃处未见愈合倾向。该动物模型符合结核性创面的实验室诊断标准,镜下可见感染灶部位有炎性浸润及多核巨细胞,对其组织进行抗酸染色,结果为阳性。

    综上所述,本研究选用了BCG对大鼠进行建模,具有安全性、可重复性、稳定性、可控性、可靠性及对疾病的代表性,为后续研究提供了稳定的动物模型实验平台,探索使用更小接种菌量和更短的感染时间可以有效缩短研究周期、提高科研效率,这可能成为今后结核性创面动物模型的研究趋势。

    本研究的不足之处:因实验条件所限,未对该模型进行深入的细胞及分子生物水平研究。本研究采用建模动物的清洁级为SPF级,针对不同免疫状态下动物建模后的表现以及BCG是否会引起动物其他系统的播散性感染,有待进一步研究。

    王淞:实施研究、起草文章;李海胜:实施研究和分析数据;钱卫、张小容:采集数据和统计分析;贺伟峰:酝酿和设计实验;罗高兴:获取研究经费和对文章的知识性内容作批评性审阅
    所有作者均声明不存在利益冲突
    严重烫伤后肠道缺血缺氧会引起肠上皮屏障受损,发生肠道细菌移位(EBT),从而导致严重的并发症,如SIRS、脓毒症和MOF的发生。囊性纤维化穿膜传导调节蛋白(CFTR)可因肠上皮细胞缺氧而表达下调,进而影响紧密连接蛋白的正常结构与功能,而紧密连接蛋白正是维持肠道屏障的关键结构。陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所陈婧老师团队联合上海交通大学第九人民医院整复外科章一新教授团队近期在《Burns & Trauma》发文《Molecular mechanism mediating enteric bacterial translocation after severe burn: the role of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator》,使用人Caco-2细胞系建立体外缺氧损伤模型,并建立C57小鼠严重烫伤模型,研究严重烫伤对小鼠肠黏膜屏障、CFTR和紧密连接蛋白表达的影响,同时选取DF 508小鼠(F508del CFTR基因突变小鼠)为体内模型,进一步证明CFTR在维持小鼠正常肠道屏障功能中的作用。研究结果显示,在缺氧条件下,人Caco-2细胞中CFTR的表达显著降低;胞外信号调节激酶(ERK)和核因子κB信号被激活;炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-8)分泌增加;带状闭合蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白和E-钙黏合素的表达下调;跨上皮电阻值降低;并导致ZO-1在细胞膜上分布不连续,排列不规则。同样地,敲除CFTR导致了相似的改变,且敲除CFTR引起的炎症因子的上调和紧密连接蛋白(ZO-1和闭合蛋白)的下调,可以通过抑制特定的ERK或核因子κB而逆转。与此同时,在严重烫伤小鼠的肠道中观察到大量的促炎症介质分泌和EBT,进一步支持了体外实验结果。与野生型小鼠相比,DF 508小鼠回肠中的TNF-α、IL-1β和IL-8浓度升高。此外,维生素D3被证明可以保护肠道上皮屏障免受缺氧损伤,机制可能与其上调CFTR表达,从而抑制ERK通路激活,减少促炎性细胞因子释放有关。此项研究结果表明,严重烫伤后,肠上皮细胞通过CFTR/ERK/促炎性细胞因子途径调节细胞间紧密连接蛋白的表达,进而调节肠道菌群移位,维生素D3可对严重烫伤后的肠黏膜屏障起到保护作用。
    杨云稀,编译自《Burns & Trauma》,2021,8:tkaa042;孙炳伟,审校
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  • 1  2组人微血管内皮细胞1划痕后各时间点剩余划痕面积 倒置相差显微镜×200,图中标尺为100 μm。1A、1B、1C.分别为P311腺病毒组划痕后0(即刻)、6、11 h,随着划痕后时间的延长,剩余划痕面积逐渐减少,至划痕后11 h划痕基本愈合;1D、1E、1F.分别为空载腺病毒组划痕后0、6、11 h,图1E、1F剩余划痕面积分别较图1B、1C明显增大

    2  2组人微血管内皮细胞1培养8 h血管形成情况 倒置相差显微镜×200,图中标尺为100 μm。2A. P311腺病毒组管状结构节点数较多,管状结构总长度较长;2B.空载腺病毒组管状结构节点数少于图2A,管状结构总长度短于图2A

    3  蛋白质印迹法检测2组人微血管内皮细胞1转染48 h VEGFR2/ERK1/2信号通路相关蛋白的表达量。3A.条带图;3B.条图(样本数为6,x¯±s

    注:VEGFR2为血管内皮生长因子受体2,ERK1/2为胞外信号调节激酶1/2,GAPDH为3-磷酸甘油醛脱氢酶;条带图上方1、2分别为P311腺病毒组和空载腺病毒组;与空载腺病毒组比较,aP<0.01

    4  蛋白质印迹法检测4组人微血管内皮细胞1转染24 h VEGFR2/ERK1/2信号通路相关蛋白的表达量。4A.条带图;4B.条图(样本数为6,x¯±s

    注:VEGFR2为血管内皮生长因子受体2,ERK1/2为胞外信号调节激酶1/2,GAPDH为3-磷酸甘油醛脱氢酶;条带图上方1、2、3、4分别为P311腺病毒+阴性对照小干扰RNA(siRNA)组、空载腺病毒+阴性对照siRNA组、P311腺病毒+siRNA- VEGFR2组和空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组;与P311腺病毒+阴性对照siRNA组比较,aP<0.01;与空载腺病毒+阴性对照siRNA组比较,bP<0.01,cP<0.05

    5  4组人微血管内皮细胞1转染24 h血管形成情况 倒置相差显微镜×200,图中标尺为100 μm。5A.P311腺病毒+阴性对照小干扰RNA(siRNA)组管状结构节点数较多,管状结构总长度较长;5B.空载腺病毒+阴性对照siRNA组管状结构节点数明显少于图5A,管状结构总长度明显短于图5A;5C.P311腺病毒+siRNA-血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)组管状结构节点数明显少于图5A,管状结构总长度明显短于图5A;5D.空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组管状结构节点数明显少于图5B,管状结构总长度明显短于图5B,且均与图5C相近

    6  蛋白质印迹法检测4组人微血管内皮细胞1处理2 h ERK1/2信号通路相关蛋白的表达量。6A.条带图;6B.条图(样本数为6,x¯±s

    注:F值、P值为4组间各指标总体比较所得;ERK1/2为胞外信号调节激酶1/2,GAPDH为3-磷酸甘油醛脱氢酶;条带图上方1、2、3、4分别为P311腺病毒+二甲基亚砜(DMSO)组、空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组和空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组;与P311腺病毒+DMSO组比较,aP<0.01;与空载腺病毒+DMSO组比较,bP<0.05

    7  4组人微血管内皮细胞1处理2 h血管形成情况 倒置相差显微镜×200,图中标尺为100 μm。7A.P311腺病毒+二甲基亚砜(DMSO)组管状结构节点数较多,管状结构总长度较长;7B.空载腺病毒+DMSO组管状结构节点数少于图7A,管状结构总长度短于图7A;7C.P311腺病毒+胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)抑制剂组管状结构节点数少于图7A,管状结构总长度短于图7A;7D.空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组管状结构节点数和总长度与图7C相近

    表1  2组人微血管内皮细胞1培养各时间点增殖活性比较(x¯±s

    组别样本数1 d3 d5 d
    P311腺病毒组60.188±0.0300.415±0.0320.713±0.030
    空载腺病毒组60.185±0.0190.392±0.0300.687±0.031
    t-0.23-1.30-1.52
    P0.8220.2220.160
    注:处理因素主效应,F=5.10,P=0.074;时间因素主效应,F=720.12,P<0.001;两者交互作用,F=0.81,P=0.473
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    表2  2组人微血管内皮细胞1划痕后各时间点剩余划痕面积百分比比较(%,x¯±s

    组别样本数6 h11 h
    P311腺病毒组647±79±5
    空载腺病毒组655±520±10
    t-2.47-2.62
    P0.0330.025
    注:初始剩余划痕面积百分比均为100%;处理因素主效应,F=18.42,P=0.008;时间因素主效应,F=443.86,P<0.001;两者交互作用,F=7.89,P=0.041
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    表3  4组人微血管内皮细胞1转染24 h后血管形成情况(x¯±s

    组别样本数管状结构节点数(个)管状结构总长度(μm)
    P311腺病毒+阴性对照siRNA组6720±6221 241±1 139
    空载腺病毒+阴性对照siRNA组6428±3817 005±1 156
    P311腺病毒+siRNA- VEGFR2组6364±5713 494±2 465
    空载腺病毒+siRNA- VEGFR2组6310±7511 600±2 776
    F57.0726.32
    P<0.001<0.001
    P1<0.0010.002
    P2<0.001<0.001
    P30.002<0.001
    P40.1270.121
    注:F值、P值为4组间各指标总体比较所得;P1值、P2值分别为P311腺病毒+阴性对照小干扰RNA(siRNA)组与空载腺病毒+阴性对照siRNA组、P311腺病毒+siRNA-血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)组比较所得,P3值、P4值分别为空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组与空载腺病毒+阴性对照siRNA组、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组比较所得
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    表4  4组人微血管内皮细胞1处理2 h血管形成情况(x¯±s

    组别样本数管状结构节点数(个)管状结构总长度(μm)
    P311腺病毒+DMSO组6726±7220 318±1 433
    空载腺病毒+DMSO组6421±3916 846±1 464
    P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组6365±4115 114±1 950
    空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组6317±6713 188±2 306
    F63.4916.53
    P<0.001<0.001
    P1<0.0010.004
    P2<0.001<0.001
    P30.0050.002
    P40.1620.083
    注:F值、P值为4组间各指标总体比较所得;DMSO为二甲基亚砜,ERK1/2为胞外信号调节激酶1/2;P1值、P2值分别为P311腺病毒+DMSO组与空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组比较所得,P3、P4值分别为空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组与空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组比较所得
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  • 收稿日期:  2021-12-10

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