摘要:
目的观察烧伤血清所致肠上皮细胞增殖、移行能力的变化,以及联合应用肠三叶因子(ITF)和黏蛋白对其的影响。方法将大鼠小肠上皮细胞株IEC-6传代培养,按照随机数字表法分为正常对照组、烧伤血清组、ITF+烧伤血清组、黏蛋白+烧伤血清组和ITF+黏蛋白+烧伤血清组,均采用DMEM培养液培养,其内分别添加体积分数10%小牛血清、体积分数10%烧伤大鼠血清、25ug/mLITF和体积分数10%烧伤大鼠血清、250ug/mL黏蛋白和体积分数10%烧伤大鼠血清以及联合使用上述剂量ITF、黏蛋白和烧伤大鼠血清。处理后0~4d观察细胞增殖能力;划痕实验后12、24、36、48、72h观察细胞移行情况;Transwell法(细胞置于上室、培养液加入下室)培养4、6、8、10、12h,观察细胞变形能力,以下室内细胞计数表示。对数据进行t检验。结果(1)细胞增殖能力。处理后1~4d烧伤血清组细胞数量明显低于正常对照组(t值为-16.569~-2.613,P〈0.05或P〈0.01)。ITF+烧伤血清组和黏蛋白+烧伤血清组细胞数量与烧伤血清组接近(t值分别为0.037~0.740、0.116~0.429,P值均大于0.05);处理后2d,ITF+黏蛋白+烧伤血清组细胞数量明显高于烧伤血清组(t=6.484,P〈0.01)、ITF+烧伤血清组(t=3.838,P〈0.01)。(2)细胞移行能力。烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离均远远短于正常对照组(t值为-37.594~-6.727,P值均小于0.01)。与烧伤血清组比较,黏蛋白+烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离无明显变化(t值为0.055—0.589,P值均大于0.05)。ITF+烧伤血清组划痕后12、24、36h细胞移行距离分别为(47±6)、(126±13)、(170±11)um,明显长于烧伤血清组[(42±7)、(98±14)、(154±22)um,t值为2.230~4.817,P〈0.05或P〈0.01]。ITF+黏蛋白+烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离明显长于烧伤血清组(t值为2.982—7.390,P〈0.05或P〈0.01),划痕后12~48h明显长于ITF+烧伤血清组(t值为2.707~2.918,P〈0.05或P〈0.01)。(3)细胞变形能力。与正常对照组比较,烧伤血清组穿孔细胞数大幅减少(t值为-23.965~-6.436,P值均小于0.01)。与烧伤血清组比较,黏蛋白+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数改变不明显(t值为0.199~0.797,P值均大于0.05);ITF+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数均明显增加(t值为3.650~10.028,P值均小于0.01)。ITF+黏蛋白+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数明显多于烧伤血清组(t值为4.313~15.100,P值均小于0.01),培养10、12h时穿孔细胞数分别为(328±47)、(465±37)个,明显多于ITF+烧伤血清组[(277±25)、(353±34)个,t值分别为3.051、6.945,P值均小于0.01]。结论ITF对肠上皮细胞增殖影响有限,但能明显改善细胞变形能力,促进细胞移行;单独使用黏蛋白对细胞无明显作用,与ITF联合应用能增强ITF的作用。ITF维护肠黏膜屏障的主要机制为促进细胞移行。