摘要:
目的了解烧伤临床鲍氏不动杆菌分离株生物膜形成过程中,密度感应基因aba I表达变化及其对生物膜ECM和细菌耐药性的影响。 方法2011年1-10月,收集上海交通大学医学院附属瑞金医院烧伤住院患者创面、血液和静脉导管来源的鲍氏不动杆菌耐药菌6株、敏感菌5株。以鲍氏不动杆菌标准菌株ATCC 19606为参照。(1)临床分离株和标准菌株体外常规培养10、24、48 h后,经碘化丙啶染色,用激光扫描共聚焦显微镜观察生物膜厚度。(2)采用试管培养法,将临床分离株和标准菌株振摇培养10、24、48 h,培养液内漂浮细菌为游离菌,黏附于试管壁的生物膜内细菌为膜内菌。采用实时荧光定量PCR技术检测各菌株中aba I基因及pgaB基因的相对表达量(标准菌株基因表达丰度设为1)。对实验数据进行方差分析。 结果 (1)鲍氏不动杆菌临床分离株体外培养10、24、48 h,生物膜厚度均超过标准菌株,其中耐药菌株生物膜厚度分别为(28.8±0.6)、( 31.7±1.1)、(38.1 +3.l)pLm,明显高于敏感菌株[(17.1±0.4)、(20.1±1.6)、( 25.8±1.7) pLm,F值分别为1274. 38、206. 60,61. 73,P值均小于0.05]。(2)膜内菌:体外培养10、24、48 h,耐药菌株abaI表达量分别为6.6 +1.7、25.7±3.5、9.8+3.6,均高于敏感菌株(2.7+1.O、15.O+3.5、4.7 +3.2,F值分别为21. 82、25. 24、6.22,P值均小于0.05);耐药菌株pgaB的表达量分别为37.4±1.1、44.5±3.6、33.1 +11.5,明显高于敏感菌株(14.6 +0.8、20.O+6.9、18.7 +6.8,F值分别为1488. 44、57. 26、6.01,P值均小于0.05)。(3)游离菌:体外培养10、24、48 h,耐药菌株aba I表达量均与敏感菌株接近(F值分别为0. 24、2.33、0.11,P值均大于0.05);耐药菌株pgaB表达量分别为13.8±3.8、12.5±2.9、23.7±2.1,明显高于敏感菌株(7.O+5.9、5.O+1.3、15.6±6.7,F值分别为5.44、28. 42、7.76,P值均小于0. 05)。(4)膜内菌与游离菌的耐药菌株比较:膜内菌各时相点abaI表达量均多于游离菌(F值分别为43. 69、286. 61、9.98.P值均小于0.05),膜内菌pgaB表达量在10、24 h多于游离菌(F值分别为214. 26、283. 20,P值均小于0.05)。(5)膜内菌与游离菌的敏感菌株比较:膜内菌aba I表达量在培养24 h多于游离菌(F=70.28,P〈0.05),pgaB表达量在10、24 h多于游离菌(F值分别为8. 03、22. 62,P值均小于0.05)。 结论烧伤临床鲍氏不动杆菌分离株生物膜形成过程中,耐药菌株的密度感应基因aba I表达明显增多,可能引起pgaB基因表达上调,导致细菌ECM及生物膜形成增加、耐药性增强。