摘要:
目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSC)对烧伤脓毒症小鼠肾脏损伤的作用及相关机制。方法(1)取5只C57BL/6J小鼠双侧腹股沟脂肪组织,采用酶消化法、密度梯度离心法及贴壁法分离培养纯化,小鼠ADSC,取第3代细胞行形态学观察、测定细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面分子标记物,并行成骨及成脂肪细胞诱导分化鉴定,(2)另取37只C57BI./6J小鼠,按随机数字表法分为正常埘照组、生理盐水组、ADSC组。正常对照组5只,其余2组各16只。生理盐水组及ADSC组小鼠造成背部15%TBSAm度烫伤后,创面中心注射铜绿假单胞菌菌液制成烧伤脓毒症小鼠模型,之后分别经尾静脉注射生理盐水和ADSC,均于伤后12、24、48、72h观察肾脏组织病理学变化、检测血肌酣和尿素氮水平,并采用实时荧光定量PCR法检测。肾脏组织TNF—a、IL-12、IL-10以及环氧合酶2(COX2)mRNA表达。正常对照组小鼠不行任何处理,但均行上述检测。对数据行多因素方蓐分析及LSD-t检验,结果(1)分离培养的细胞传至第3代时,形态均一与Fb相似,排列规则;CD90‘、CDl05’、CD34-、CD45细胞百分比均在90%以L;细胞可向成脂和成骨细胞分化;经签定,细胞为ADSC。(2)伤后12~72h,牛理盐水组小鼠肾小管和肾小球中中性粒细胞浸润逐渐增多,管腔受损、肾小球结卡勾被破坏。ADSC组小鼠伤后各时相点肾组织病理学损伤程度均轻于生理盐水组。生理盐水组各时卡fj点m肌酐、尿素氮水平均明显高于正常对照组(P值均小于0.01);伤后12~72h.与生理盐水组比较,AI)SC组血肌酐、尿素氮水平均明显下降(P值均小于0.01)。与正常对照组比较,伤后24h生理盐水组及ADSC组TNF-a、IL-12mRNA表达量均升高(P值均小于0.05)。伤后2411,ADSC组TNF—dtuRNA水平(1.58±0.19)明最低于生理盐水组的3.36±0.30(P〈0.05)。伤后24h,ADSC组IL-10、COX2mRNA水平分别为2.89±0.47、4.90±0.59,均高于正常照绀的1.00±0.15、1.00±0.27和q|理盐水组的1.32±0.38、1.57±0.38(P值均小于0.05)。结论AI)SC可降低血肌酣和尿素氮水平,促进抗炎因子IL-10、COX2生成,抑制促炎因子TNF-a、IL-12释放,对烧伤脓毒症小鼠肾脏损伤有保护作用。