摘要: 目的了解通过改良传代技术是否可获取高增殖活性的大鼠KC，为体外研究提供种子细胞。方法将从3只清洁级新生SD大鼠背部皮肤中分离、培养的原代KC按随机数字表法分为改良组和传统组，改良组采用0．25g／L胰蛋白酶联合0．4g／L乙二胺四乙酸消化传代，传统组采用2．5g／L胰蛋白酶结合0．4g／L乙二胺四乙酸消化传代。收集2组原代细胞及传代细胞于倒置相差显微镜下进行形态学观察。取部分第1代细胞，应用锥虫蓝染色法观察细胞存活情况并计算存活率（样本数为3）；另取第1代细胞培养1、12、24h，噻唑蓝比色法进行细胞黏附实验（以吸光度值表示黏附细胞数量，每时相点样本数为6）。取第5代细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期，B半乳糖苷酶染色法计算衰老细胞百分比。对数据行LSD-t检验。结果改良组原代细胞、第5代细胞及第18代细胞形态类似，呈圆形或小的多角形，或呈鹅卵石样；传统组原代细胞形态与改良组类似，第5代细胞胞体变大，增殖缓慢，呈片状覆盖，无法再继续传代。改良组细胞存活率为（94．6±1．7）％，显著高于传统组[（66．2±2．6）％，t=15．815，P〈0．05]。培养1、12、24h，改良组黏附细胞数量分别为0．205±0．015、0．225±0．014、0．265±0．021，均显著多于传统组（0．176±0．015、0．196±0．011、0．221±0．019，t值分别为2．947、3．517、3．476，P值均小于0．05）。改良组（S＋G2／M）期细胞所占比例[（30．6±2．3）％]显著高于传统组[（17．0±5．6）％，t=3．890，P〈0．05]。改良组衰老细胞百分比[（10．9±2．0）％]显著低于传统组[（75．9±4．1）％，t=24．624，P〈0．05]。结论低浓度胰蛋白酶消化法能减轻细胞损伤、提高细胞活性、增加传代次数，为实验研究创造良好条件。