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2022年  第38卷  第2期

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指南与共识
烧伤航空医疗转运全国专家共识（2022版）
中华医学会烧伤外科学分会, 刘琰
2022, 38(2): 101-108. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20211025-00366
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摘要:
我国烧伤救治单位分布呈现出中心化、区域化的演变趋势，为解决严重烧伤患者距离烧伤救治单位较远、发生重大群体性烧伤事故时区域烧伤医疗中心超负荷运转、航空转运需求日益增加等问题，亟须完善我国烧伤患者航空医疗转运体系。本共识由中华医学会烧伤外科学分会联合航空医疗救援国家培训基地及中国医学救援协会专家组成的专家组，从航空医疗转运的组织架构、人员与物资配备、转运前中后3个环节等方面要点进行叙述，以期为我国烧伤患者航空医疗转运的安全、高效、规范运行提供指导意见。
专家论坛
中性粒细胞生理与病理生理作用再认识
孙炳伟, 黄佳敏
2022, 38(2): 109-113. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20211122-00391
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摘要:
中性粒细胞一直被认为是先天免疫系统中一种短寿命的、同质的细胞类型，具有有限的促/抗炎作用。然而最近10年，随着研究的深入，对中性粒细胞的了解正在经历着某种复兴。对中性粒细胞的异质性及其与其他免疫细胞相互作用机制的研究促进了研究者对中性粒细胞生理与病理生理作用的再认识。在接下来的数十年中，随着单细胞测序技术、空间转录组测序技术以及多组学联合测序技术的发展，研究者将对中性粒细胞的生物学行为认识得更为透彻。本文对近年来中性粒细胞的多种生物学行为及其在多种疾病中的作用进行简要评述。
皮肤γδT细胞各亚群在创面再上皮化过程中的调控作用及其相关机制
贺伟峰
2022, 38(2): 114-118. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20211210-00411
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摘要:

再上皮化过程是决定皮肤创面愈合进程的核心环节之一。表皮干细胞增殖分化形成新生表皮组织是再上皮化的组织学基础，而表皮干细胞—前体细胞—终末细胞这一细胞分化过程顺利进行是新生表皮组织不断形成的细胞学基础。表皮干细胞增殖及分化为前体细胞是新生表皮组织增殖潜力的决定因素，而前体细胞扩增及分化为终末细胞是决定新生表皮组织形成速度的关键因素。组织微环境在创面再上皮化过程中发挥关键的调控作用，而细胞生长因子和炎症介质是构成创面组织微环境的2个重要组成成分，分别在表皮干细胞增殖分化的不同环节发挥调节作用，协同促进创面再上皮化顺利进行。γδT细胞是皮肤免疫系统中的重要组成部分，其不同亚群分别通过分泌生长因子和炎症因子在动态塑造早期创面微环境中起关键作用。本文从创面免疫微环境的角度出发，简要论述皮肤γδT细胞在维持表皮干细胞增殖分化平衡以及调控创面再上皮化中的作用，为难愈性创面的预防及治疗提供新方向。
论著·烧伤后炎症与免疫
P311对人微血管内皮细胞1体外血管形成能力的影响及其分子机制
王淞, 李海胜, 钱卫, 张小容, 贺伟峰, 罗高兴
2022, 38(2): 119-129. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20211210-00410
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摘要:
      目的     探讨P311对人微血管内皮细胞1（HMEC-1）血管形成能力的影响及其可能的分子机制。      方法     采用实验研究方法。取HMEC-1，按随机数字表法（分组方法下同）分为P311腺病毒组和空载腺病毒组，分别进行48 h相应转染后，采用细胞计数试剂盒8法检测培养1、3、5 d细胞增殖活性；划痕试验检测细胞划痕后6、11 h剩余划痕面积，并计算剩余划痕面积百分比；体外血管形成实验观察细胞培养8 h血管形成情况，并测量管状结构节点数和总长度；蛋白质印迹法检测细胞中血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、磷酸化VEGFR2、胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）及磷酸化ERK1/2蛋白表达量。取HMEC-1，分为P311腺病毒+阴性对照小干扰RNA（siRNA）组、空载腺病毒+阴性对照siRNA组、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组和空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组，分别进行相应的处理，蛋白质印迹法检测转染24 h细胞中VEGFR2、磷酸化VEGFR2、ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量；体外血管形成实验观察转染24 h细胞血管形成情况，并测量管状结构节点数和总长度。取HMEC-1，分为P311腺病毒+二甲基亚砜（DMSO）组、空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组和空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组，分别进行相应的处理。蛋白质印迹法检测处理2 h细胞中ERK1/2及磷酸化ERK1/2蛋白表达量；体外血管形成实验观察处理2 h细胞血管形成情况，并测量管状结构节点数和总长度。各组各时间点样本数均为6。对数据行独立样本t检验、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验。      结果     与空载腺病毒组比较，P311腺病毒组细胞培养1、3、5 d增殖活性均没有明显改变（t值分别为-0.23、-1.30、-1.52，P>0.05）。P311腺病毒组细胞划痕后6、11 h剩余划痕面积百分比均较空载腺病毒组明显降低（t值分别为-2.47、-2.62，P<0.05）。培养8 h，与空载腺病毒组比较，P311腺病毒组细胞管状结构节点数和总长度均明显增加（t值分别为4.49、4.78，P<0.01）。转染48 h，与空载腺病毒组比较，P311腺病毒组细胞VEGFR2、ERK1/2蛋白表达量均无明显变化（P>0.05），磷酸化VEGFR2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显升高（t值分别为17.27、16.08，P<0.01）。转染24 h，P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞磷酸化VEGFR2和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于空载腺病毒+阴性对照siRNA组（P<0.01），P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞VEGFR2、磷酸化VEGFR2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组（P<0.01），空载腺病毒+阴性对照siRNA组细胞VEGFR2、磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组（P<0.05或P<0.01）。转染24 h，P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞管状结构节点数为（720±62）个，明显多于空载腺病毒+阴性对照siRNA组的（428±38）个、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组的（364±57）个（P值均<0.01）；P311腺病毒+阴性对照siRNA组细胞管状结构总长度为（21 241±1 139）μm，明显长于空载腺病毒+阴性对照siRNA组的（17 005±1 156）μm、P311腺病毒+siRNA-VEGFR2组的（13 494±2 465）μm（P值均<0.01）。空载腺病毒+阴性对照siRNA组细胞管状结构节点数明显多于空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组的（310±75）个（P<0.01），管状结构总长度明显长于空载腺病毒+siRNA-VEGFR2组的（11 600±2 776）μm（P<0.01）。处理2 h，P311腺病毒+DMSO组细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达量明显高于空载腺病毒+DMSO组、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组（P值均<0.01），空载腺病毒+DMSO组细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达量明显高于空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组（P<0.05）。处理2 h，P311腺病毒+DMSO组细胞管状结构节点数为（726±72）个，明显多于空载腺病毒+DMSO组的（421±39）个、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组的（365±41）个（P值均<0.01）；P311腺病毒+DMSO组细胞管状结构总长度为（20 318±1 433）μm，明显长于空载腺病毒+DMSO组的（16 846±1 464）μm、P311腺病毒+ERK1/2抑制剂组的（15 114±1 950）μm（P值均<0.01）。空载腺病毒+DMSO组管状结构节点数明显多于空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组的（317±67）个（P<0.01），管状结构总长度明显长于空载腺病毒+ERK1/2抑制剂组的（13 188±2 306）μm（P<0.01）。      结论     P311能够通过激活VEGFR2/ERK1/2信号通路发挥促进HMEC-1血管形成的作用。
高密度脂蛋白胆固醇对脓毒症患者继发急性肾损伤的早期预测价值
李京宴, 姚咏明, 田英平
2022, 38(2): 130-136. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20210917-00325
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摘要:
  目的  探讨脓毒症患者高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平的变化及其对该类患者继发急性肾损伤（AKI）的早期预测价值。  方法  采用回顾性病例系列研究方法。2019年6月—2021年6月，河北医科大学第二医院收治232例符合入选标准的脓毒症患者，其中男126例、女106例，年龄24~71岁。依据是否继发AKI，将患者分为非AKI组（158例）和AKI组（74例）。对比2组患者入院时性别、年龄、身体质量指数（BMI）、体温、心率、原发感染部位、合并基础疾病情况、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分及脓毒症相关性器官功能衰竭评价（SOFA）评分，确诊脓毒症时检测的血清C反应蛋白（CRP）、降钙素原、肌酐、胱抑素C及HDL-C水平，对数据进行独立样本t检验、χ2检验。对2组比较差异有统计学意义的指标进行多因素logistic回归分析，筛选影响232例脓毒症患者继发AKI的独立危险因素，并以独立危险因素为基础构建联合预测模型。绘制独立危险因素与联合预测模型预测232例脓毒症患者继发AKI的受试者操作特征（ROC）曲线，计算曲线下面积（AUC）及最佳阈值与最佳阈值下的敏感度、特异度。采用Delong检验对前述AUC的质量进行比较，采用χ2检验对最佳阈值下的敏感度和特异度进行比较。  结果  2组患者性别、年龄、BMI、体温、心率、原发感染部位、合并基础疾病以及CRP水平均相近（P>0.05）；AKI组患者降钙素原、肌酐、胱抑素C、APACHE Ⅱ评分及SOFA评分均明显高于非AKI组（t值分别为-3.21、-16.14、-12.75、-11.13、-12.88， P<0.01），HDL-C水平显著低于非AKI组（t=6.33，P<0.01）。多因素logistic回归分析显示，肌酐、胱抑素C、HDL-C是232例脓毒症患者继发AKI的独立危险因素（比值比分别为2.45、1.68、2.12，95%置信区间分别为1.38~15.35、1.06~3.86、0.86~2.56，P<0.01）。肌酐、胱抑素C、HDL-C、联合预测模型预测232例脓毒症患者继发AKI的ROC的AUC分别为0.69、0.79、0.89、0.93（95%置信区间分别为0.61~0.76、0.72~0.85、0.84~0.92、0.89~0.96，P值均<0.01），最佳阈值分别为389.53 μmol/L、1.56 mg/L、0.63 mmol/L、0.48，最佳阈值下的敏感度分别为76.6%、81.4%、89.7%、95.5%，最佳阈值下的特异度分别为78.6%、86.7%、88.6%、96.6%。胱抑素C的AUC质量明显优于肌酐（z=2.34，P<0.05），HDL-C的AUC质量及最佳阈值下的敏感度、特异度均明显优于胱抑素C（z=3.33，χ2值分别为6.43、7.87，P<0.01）与肌酐（z=5.34，χ2值分别为6.32、6.41，P<0.01），联合预测模型的AUC质量及最佳阈值下的敏感度、特异度均明显优于肌酐、胱抑素C、HDL-C（z值分别6.18、4.50、2.06，χ2值分别5.31、7.23、3.99，6.56、7.34、4.00，P<0.05或P<0.01）。  结论  脓毒症继发AKI患者HDL-C水平较未继发AKI患者明显降低，该指标是脓毒症患者继发AKI的独立危险因素，其诊断价值优于肌酐和胱抑素C，前述3个指标联合对脓毒症患者继发AKI的预测价值更高。
胸骨正中切口感染患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体的基因组学信息及生物学特性分析
张建, 燕荣帅, 杨子晨, 石茜, 李翔, 毛彤春, 张一鸣
2022, 38(2): 137-146. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20211130-00400
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摘要:
  目的  分离提纯1株新型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的噬菌体，并对其基因组学信息和生物学特性进行分析。  方法  采用实验研究方法。取分离自陆军军医大学（第三军医大学）第二附属医院收治的1例胸骨正中切口感染的63岁女性患者创面的MRSA（下称宿主菌）液，采用污水共培养法和双层琼脂平板法从该院污水中分离提纯得到噬菌体，并命名为噬菌体SAP23，观察噬菌斑形态。采用磷钨酸负染法将噬菌体SAP23染色，采用透射电子显微镜观察其形态。采用十二烷基磺酸钠/蛋白酶裂解方案制备噬菌体SAP23 DNA，在Illumina NovaSeq PE150平台下进行全基因组测序，并完成序列组装、注释、系统发生树等基因组学分析。将噬菌体SAP23液分别按10.000 0、1.000 0、0.100 0、0.010 0、0.001 0、0.000 1感染复数与宿主菌液共培养4 h后，采用点滴法测定噬菌体效价，筛选最佳感染复数，此处及以下样本数均为3。按测得的最佳感染复数取噬菌体SAP23液与宿主菌液分别共同孵育5、10、15 min后，同前测定噬菌体效价，筛选最佳吸附时间。按测得的最佳感染复数取噬菌体SAP23液与宿主菌液按最佳吸附时间孵育后，分别于培养0（即刻）、5、10、15、20、30、40、50、60、80、100、120 min，同前测定噬菌体效价，绘制一步生长曲线。取噬菌体SAP23液分别在温度为4、37、50、60、70、80 ℃下，在pH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12下孵育1 h，测定稳定性。取陆军军医大学（第三军医大学）微生物教研室储存的41株MRSA，完成噬菌体SAP23的宿主谱范围检测。  结果  噬菌体SAP23能在宿主菌双层琼脂板上形成透明噬菌斑。噬菌体SAP23头部是直径为（88±4）nm的多面体，其尾部长度为（279±21）nm、宽度为（22.6±2.6）nm。噬菌体SAP23基因组为全长151 618 bp的线状双链DNA，序列两端有11 681 bp的长末端重复序列，预测出220个开放阅读框，噬菌体可编码4个转运RNA，未预测出毒力因子或抗性基因，注释功能的噬菌体SAP23基因可分为5个组，GenBank登录号为MZ427930，噬菌体SAP23全基因组序列与共线性分析中的6个葡萄球菌噬菌体全基因组序列有5个局部共线区域，但在局部共线区域内部或外部存在差异。噬菌体SAP23属于Herelleviridae科Twortvirinae亚科Kayvirus病毒属。噬菌体SAP23的最佳感染复数为0.010 0，最佳吸附时间为10 min，潜伏期约为20 min，裂解期约为80 min；在4~37 ℃温度条件及pH值为4~9的条件中，稳定性较好。噬菌体SAP23可裂解41株MRSA中的3株。  结论  噬菌体SAP23为Herelleviridae科Twortvirinae亚科Kayvirus病毒属成员，潜伏期短，其对温度和酸碱耐受性好，可有效裂解MRSA，为不含毒力因子和抗性基因的新型烈性窄谱噬菌体。
论著
严重烧伤患者休克期肝素结合蛋白的变化及其对人脐静脉血管内皮细胞和中性粒细胞的影响
戚欣欣, 刘璐, 杨云稀, 黄佳敏, 孙炳伟
2022, 38(2): 147-155. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20210805-00269
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摘要:
  目的  探讨严重烧伤患者休克期肝素结合蛋白（HBP）的变化及其在体外对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和中性粒细胞的影响。  方法  采用前瞻性观察性研究与实验研究方法。将2020年8—11月南京医科大学附属苏州医院烧伤整形科收治的符合入选标准的20例严重烧伤患者纳入严重烧伤组［男12例、女8例，年龄为44.5（31.0，58.0）岁］，同期招募该单位体检中心体检结果正常的20名健康志愿者纳入健康对照组［男13例、女7例，年龄为39.5（26.0，53.0）岁］。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测健康对照组志愿者血浆与严重烧伤组患者伤后48 h内血浆中HBP和组织金属蛋白酶抑制物1（TIMP-1）蛋白表达水平，分别对2组血浆中HBP和TIMP-1蛋白表达的相关性进行Pearson相关分析。取第4代对数生长期HUVEC进行实验，将细胞按随机数字表法（分组方法下同）分为常规培养的正常对照组（处理下同）与进行相应处理的重组HBP（rHBP）处理12 h组、rHBP处理24 h组、rHBP处理48 h组，采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中TIMP-1的mRNA表达；将细胞分为正常对照组与进行相应处理的rHBP处理48 h组，采用蛋白质印迹法检测细胞中TIMP-1蛋白表达；将细胞分为正常对照组与加入相应试剂处理的单纯rHBP组、单纯抑蛋白酶多肽组、rHBP+抑蛋白酶多肽组（rHBP终物质的量浓度为200 nmol/L，抑蛋白酶多肽终质量浓度为20 μg/mL），培养48 h，采用ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平。采用免疫磁珠分选法从前述10名健康志愿者外周静脉血中分离中性粒细胞，将细胞分为正常对照组与加入相应试剂处理的单纯重组TIMP-1（rTIMP-1）组、单纯佛波酯组、rTIMP-1+佛波酯组（rTIMP-1终质量浓度为500 ng/mL，佛波酯终物质的量浓度为10 nmol/L），培养1 h，采用免疫荧光法观测细胞中CD63蛋白表达，采用流式细胞术检测细胞中CD63蛋白阳性表达率，采用ELISA法检测细胞培养上清液中HBP和髓过氧化物酶（MPO）蛋白表达水平。正常对照组均于适宜时间点进行前述相关检测，细胞实验中各组样本数均为3。对数据行χ2检验、Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验、Tamhane T2检验。  结果  严重烧伤组患者血浆中HBP、TIMP-1蛋白表达水平分别为404.9（283.1，653.2）、262.1（240.6，317.4）ng/mL，均明显高于健康对照组志愿者的61.6（45.0，68.9）、81.0（66.3，90.0）ng/mL（Z值分别为-5.41、-5.21，P<0.01）。健康对照组志愿者血浆中HBP和TIMP-1蛋白表达相关性不强（P>0.05），严重烧伤组患者血浆中HBP和TIMP-1蛋白表达呈明显正相关（r=0.64，P<0.01）。与正常对照组比较，rHBP处理12 h组、rHBP处理24 h组、rHBP处理48 h组HUVEC中TIMP-1 mRNA表达水平均显著升高（t值分别为-3.58、-2.25、-1.26，P<0.05）。蛋白质印迹法检测显示，与正常对照组比较，rHBP处理48 h组HUVEC中TIMP-1蛋白表达明显增强。培养48 h，与正常对照组比较，单纯rHBP组HUVEC培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平显著升高（t=9.43，P<0.05），单纯抑蛋白酶多肽组、rHBP+抑蛋白酶多肽组HUVEC培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平均无明显变化（P>0.05）；与单纯rHBP组比较，rHBP+抑蛋白酶多肽组HUVEC培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平显著下降（t=4.76，P<0.01）。培养1 h，免疫荧光法和流式细胞术检测的各组中性粒细胞CD63蛋白表达结果趋势一致。培养1 h，与正常对照组比较，单纯rTIMP-1组中性粒细胞中CD63蛋白阳性表达率及细胞培养上清液中HBP、MPO蛋白表达水平均无明显变化（P>0.05），单纯佛波酯组、rTIMP-1+佛波酯组中性粒细胞中CD63蛋白阳性表达率及细胞培养上清液中HBP、MPO蛋白表达水平均明显升高（t值分别为2.41、3.82，5.73、1.05、4.16、1.08，P<0.05或P<0.01）；与单纯佛波酯组比较，rTIMP-1+佛波酯组中性粒细胞中CD63蛋白阳性表达率及细胞培养上清液中HBP、MPO蛋白表达水平均明显下降（t值分别为5.26、2.83、1.26，P<0.05或P<0.01）。  结论  严重烧伤患者休克期血浆中HBP表达水平增加；HBP可在体外诱导HUVEC分泌TIMP-1，TIMP-1可降低人中性粒细胞CD63分子表达。
229例手部氢氟酸烧伤患者的流行病学特征和治疗结局分析
张曼佳, 毛书雷, 张建芬, 王新刚, 倪良方, 张元海
2022, 38(2): 156-164. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20210517-00188
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摘要:
    目的   探讨手部氢氟酸烧伤患者的流行病学特征及治疗结局。    方法   采用回顾性观察性研究方法。收集浙江衢化医院2008年1月—2020年12月收治的符合入选标准的229例手部氢氟酸烧伤患者的病历资料，统计患者的性别、年龄、所在企业类型、氢氟酸质量分数、烧伤部位、烧伤总面积、院前时间、住院天数、创面愈合天数、入院时是否有低钙血症和低镁血症、是否行手术治疗、有无瘢痕后遗症。采用单因素和多因素logistic回归分析筛选影响全部患者和氢氟酸质量分数已知的患者手术治疗和瘢痕后遗症的危险因素，采用单因素和多因素线性回归分析筛选影响全部患者和氢氟酸质量分数已知的患者创面愈合天数的危险因素。    结果   229例患者中男206例、女23例，年龄主要集中在30~50岁（139例），大部分患者的所在企业类型为非氟化工企业，仅91例患者的致伤氢氟酸质量分数已知（以中质量分数为主），常见的烧伤部位为手指中末节，烧伤总面积均≤1%体表总面积，院前时间为19（9，29）h，住院天数为2（1，7）d，创面愈合天数为12（8，18）d，入院时有低钙血症、低镁血症的比例分别为0.9%（2/229）、1.3%（3/229），36例患者行手术治疗，83例患者有瘢痕后遗症。针对229例患者，单因素logistic回归分析显示，所在企业类型、院前时间均是患者手术治疗（比值比分别为7.86、51.35，95%置信区间分别为1.83~33.76、11.89~221.78，P<0.01）和瘢痕后遗症（比值比分别为3.62、27.40，95%置信区间分别为1.76~7.43、13.25~56.68，P<0.01）的影响因素；多因素logistic回归分析显示，院前时间是影响患者手术治疗和瘢痕后遗症的独立危险因素（比值比分别为43.00、24.55，95%置信区间分别为9.89~187.03、11.78~51.16，P<0.01）；单因素线性回归分析显示，所在企业类型、院前时间均是患者创面愈合天数的影响因素（β值分别为6.16、12.83，95%置信区间分别为3.38~8.93、10.72~14.93，P<0.01）；多因素线性回归分析显示，所在企业类型、院前时间均是影响患者创面愈合天数的独立危险因素（β值分别为2.81、12.16，95%置信区间分别为0.50~5.13、10.00~14.31，P<0.05或P<0.01）。针对91例氢氟酸质量分数已知的患者，单因素logistic回归分析显示，所在企业类型、氢氟酸质量分数（低和高）、院前时间均是患者手术治疗的影响因素（比值比分别为9.10、11.25、10.69、0.04，95%置信区间分别为1.15~72.25、1.39~90.93、1.32~86.59、0.01~0.19，P<0.05或P<0.01），所在企业类型、氢氟酸质量分数、院前时间均是患者瘢痕后遗症的影响因素（比值比分别为0.32、0.21、36.80，95%置信区间分别为0.11~0.92、0.06~0.73、11.03~122.79，P<0.05或P<0.01）；多因素logistic回归分析显示，氢氟酸质量分数、院前时间均是影响患者手术治疗的独立危险因素（比值比分别为11.51、0.04，95%置信区间分别为1.22~108.26、0.01~0.25，P<0.05或P<0.01），院前时间是影响患者瘢痕后遗症的独立危险因素（比值比=37.71，95%置信区间为9.97~142.69，P<0.01）；单因素线性回归分析显示，所在企业类型、氢氟酸质量分数（低和高）、院前时间均是患者创面愈合天数的影响因素（β值分别为7.12、-5.63、-9.74、13.50，95%置信区间分别为2.43~11.81、-10.59~-0.68、-14.78~-4.70、10.14~16.86，P<0.05或P<0.01）；多因素线性回归分析显示，氢氟酸质量分数、院前时间均是影响患者创面愈合天数的独立危险因素（β值分别为-5.84、0.09，95%置信区间分别为-10.59~-1.08、0.05~0.12，P<0.05或P<0.01）。    结论   手部氢氟酸烧伤发病人群以中青年男性为主，所在企业类型、氢氟酸质量分数、院前时间是影响手部氢氟酸烧伤患者治疗结局的危险因素。
二纵三横法在胸背动脉穿支皮瓣穿支定位及深度创面修复中的临床应用效果
黄广涛, 魏在荣, 黄丽, 李书俊, 陈伟, 杨成兰, 聂开瑜, 邓呈亮, 王达利
2022, 38(2): 165-169. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20201207-00519
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摘要:
  目的  探讨二纵三横法在胸背动脉穿支皮瓣穿支定位及深度创面修复中的临床应用价值。  方法  采用回顾性观察性研究方法。2018年12月—2020年6月，遵义医科大学附属医院收治17例符合入选标准的深度创面患者，其中男7例、女10例，年龄12~72岁。清创后创面面积为7 cm×3 cm~11 cm×7 cm。通过腋窝中点、髂后上棘和骶髂关节突出点定位2条纵线，在2条纵线间通过腋窝中点下5、10、15 cm定位3条横线（即二纵三横法），从而形成2个梯形区域，再使用便携式多普勒血流探测仪在2个梯形区域内探寻胸背动脉穿支，以此设计并切取单个、分叶或携带部分背阔肌的面积为7 cm×4 cm~12 cm×8 cm的游离胸背动脉穿支皮瓣修复创面。供区均直接缝合。记录术前定位与术中探查胸背动脉穿支数量、位置及第1穿支（距离腋窝顶点最近的穿支）穿出肌肉的位置距离背阔肌外侧缘的长度，术中测量的胸背动脉穿支管径，采用的组织瓣类型；术后随访组织瓣成活情况与供区外观。  结果  每例患者术前定位胸背动脉穿支数量、位置与术中探查情况一致，穿支数量为2条或3条（共42条）；穿支均位于2个梯形区域内，在第1个梯形区域中均定位和探查到1条稳定的穿支（第1穿支），第2个梯形区域的平均穿支数量为1.47条；第1穿支穿出肌肉的位置距离背阔肌外侧缘2.1~3.1 cm。术中测量的胸背动脉穿支管径为0.4~0.6 mm。本组患者中12例采用单个胸背动脉穿支皮瓣、3例采用胸背动脉穿支分叶皮瓣、2例采用携带部分背阔肌的胸背动脉穿支皮瓣。术后随访6~16个月，17例患者组织瓣均成活，质地柔软、弹性好、血运良好；供区仅遗留线性瘢痕。  结论  二纵三横法有助于胸背动脉穿支皮瓣的穿支定位，方法简单可靠，基于该方法设计切取的胸背动脉穿支皮瓣修复深度创面的临床效果良好，供区损伤小。
人蜕膜间充质干细胞来源外泌体对高糖老化人真皮成纤维细胞功能的影响及其可能机制
苏建隆, 马奎, 张翠萍, 付小兵
2022, 38(2): 170-183. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20210925-00330
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摘要:
      目的     建立人真皮成纤维细胞（HDF）高糖老化模型，探讨人蜕膜间充质干细胞（dMSC）来源外泌体对高糖老化HDF增殖、迁移、凋亡的影响及其可能机制。      方法     采用实验研究方法。收集2021年1—3月解放军总医院第四医学中心收治的4例男性包茎患者（18~22岁）环切术后废弃包皮组织，分离培养获取原代HDF。取第6代HDF，按照随机数字表法分为低糖组和高糖组，分别采用低糖完全培养基和高糖完全培养基进行每72小时换液、不传代培养，10 d后取细胞，于接种后24 h，采用β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老情况；于接种后48 h，采用蛋白质印迹法检测细胞衰老相关蛋白p16、p53表达情况；于接种后24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞增殖情况；于接种后48 h，采用脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测细胞增殖情况，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况；于接种后24 h，采用Transwell实验测定细胞迁移能力。取人dMSC培养48~72 h，采用差速高速离心法获取其外泌体，采用透射电子显微镜观察dMSC外泌体形态，采用纳米颗粒追踪分析法检测dMSC外泌体的粒径分布，采用蛋白质印迹法检测dMSC外泌体标志蛋白CD9、肿瘤易感基因101（TSG101）的表达。取dMSC外泌体及前述高糖完全培养基诱导老化的HDF共孵育24 h，采用PKH67试剂盒检测细胞摄取外泌体的情况。取前述高糖完全培养基诱导老化的HDF，同前分为单纯高糖组、高糖+低浓度外泌体组、高糖+高浓度外泌体组，分别于高糖完全培养基中加入等体积的磷酸盐缓冲液、终质量浓度为50 μg/mL dMSC外泌体、终质量浓度为100 μg/mL dMSC外泌体进行常规细胞培养。分组后同前于对应时间点采用CCK-8法和EdU染色法、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期和凋亡及细胞迁移情况。根据前述结果，另取经高糖完全培养基诱导老化的HDF，分为单纯高糖组、高糖+高浓度外泌体组并同前处理。分组培养48 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测单纯高糖组和高糖+高浓度外泌体组细胞衰老相关的微小RNA-145-5p（miR-145-5p）、miR-498、miR-503-5p及其靶基因钙/钙调素依赖性蛋白激酶1D（CAMK1D）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN基因）和细胞周期蛋白D1的mRNA表达情况。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD-t检验和独立样本t检验。      结果     接种后24 h，高糖组HDF β-半乳糖苷酶阳性染色率为（38.4±4.2）%，明显高于低糖组的（16.5±2.2）%（t=4.65，P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF的衰老相关蛋白p16和p53的表达量均明显高于低糖组（t值分别为11.85、3.02，P<0.05或P<0.01）。接种后24、48、72 h，高糖组HDF的增殖活性均明显低于低糖组（t值分别为4.13、9.90、15.12，P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF的EdU阳性染色率明显低于低糖组（t=3.83， P<0.05）。接种后48 h，高糖组HDF周期的G2/M+S亚群在3个亚群（G0/G1、S和G2/M）的占比明显低于低糖组（t=8.74，P<0.01）。接种后24 h，高糖组HDF穿过Transwell滤膜到达下室的细胞数量为（37±6）个，明显少于低糖组的（74±7）个（t=8.42，P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF凋亡率明显高于低糖组（t=8.48，P<0.01）。dMSC外泌体为边缘清晰、大小分布均匀的杯状或者圆形囊泡，粒径基本处于80~200 nm。dMSC外泌体标志性蛋白CD9、TSG101表达均呈阳性。共孵育24 h，外泌体被HDF摄入胞内，主要分布于细胞核周围。分组培养24、48、72 h，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF增殖活性均明显高于单纯高糖组（t值分别为6.36、6.10、7.76，8.92、12.17、10.74，P<0.01），高糖+高浓度外泌体组HDF增殖活性均明显高于高糖+低浓度外泌体组（t值分别为7.92、4.82、4.72，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF EdU阳性染色率均明显升高（t值分别为5.32、9.88，P<0.01）；与高糖+低浓度外泌体组比较，高糖+高浓度外泌体组HDF EdU阳性染色率显著升高（t=5.27，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF中的G0/G1期亚群占比均显著降低（t值分别为3.81、4.31，P<0.05），G2/M+S亚群占比均明显升高（t值分别为3.81、4.31，P<0.05）。分组培养24 h，与单纯高糖组相比，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF穿过滤膜的数量均明显增多（t值分别为10.14、13.39，P<0.01）；与高糖+低浓度外泌体组相比，高糖+高浓度外泌体组HDF穿过滤膜的数量明显增多（t=6.27，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF凋亡率均明显降低（t值分别为3.72、5.53，P<0.05或P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组相比，高糖+高浓度外泌体组HDF的miR-145-5p、miR-498 mRNA表达量均明显上升（t值分别为13.03、8.90，P<0.01），miR-503-5p mRNA表达量明显下降（t=3.85，P<0.05）；高糖+高浓度外泌体组中HDF的CAMK1D、PTEN基因mRNA表达量均明显低于单纯高糖组（t值分别为8.83、5.97，P<0.01），细胞周期蛋白D1 mRNA表达量明显高于单纯高糖组（t=4.03，P<0.05）。      结论     人dMSC来源外泌体可显著提高高糖老化HDF的增殖和迁移能力，抑制其凋亡。这可能与HDF内miR-145-5p和miR-498表达增高抑制了CAMK1D和PTEN基因的表达及miR-503-5p表达下降促进了细胞周期蛋白D1的表达有关。
论著·护理专栏
三种评分预测严重烧伤患者死亡风险的对比研究
谢志勤, 郭光华, 杨珍, 易含笑, 王水连, 唐鑫荣, 刘德广, 曾彦德
2022, 38(2): 184-189. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20201113-00473
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摘要:
  目的  探讨改良Baux评分、比利时烧伤预后评分、Ryan评分对严重烧伤患者死亡风险的预测价值，并进行对比研究。  方法  采用回顾性病例系列研究方法。2018年2月—2019年11月，南昌大学第一附属医院烧伤科收治260例符合入选标准的严重烧伤患者，其中男158例、女102例，年龄36（3，53）岁。根据最终结局，将患者分为存活组（229例）和死亡组（31例），比较2组患者入院时性别、年龄、烧伤原因、烧伤部位、烧伤总面积、烧伤深度、合并吸入性损伤情况、合并基础疾病情况，以及根据前述部分资料计算的改良Baux评分、比利时烧伤预后评分、Ryan评分，对数据进行χ2检验或Mann-Whitney U检验。采用Kendall tau-b系数法对260例严重烧伤患者前述3种评分结果进行一致性分析。分别绘制前述3种评分预测260例严重烧伤患者死亡风险的受试者操作特征曲线（ROC），计算曲线下面积（AUC）及最佳阈值与最佳阈值下的敏感度、特异度。采用Delong检验对前述3种评分AUC的质量进行比较。  结果  2组患者性别、烧伤部位、烧伤深度均相近（P>0.05）；死亡组患者年龄、烧伤总面积、火焰烧伤比例、合并吸入性损伤比例、合并基础疾病比例均明显大于存活组（Z值分别为5.53、7.18，χ2值分别为16.23、15.89、17.78，P<0.01）；死亡组患者改良Baux评分、比利时烧伤预后评分、Ryan评分分别为142（115，155）、7（5，7）、2（2，3）分，均明显高于存活组的64（27，87）、1（0，3）、0（0，1）分（Z值分别为7.91、7.64、7.61，P<0.01）。在260例严重烧伤患者中，改良Baux评分与Ryan评分、改良Baux评分与比利时烧伤预后评分、Ryan评分与比利时烧伤预后评分结果均具有显著一致性（Kendall tau-b系数分别为0.75、0.71、0.86，P<0.01）。改良Baux评分、比利时烧伤预后评分、Ryan评分对260例严重烧伤患者死亡风险预测的ROC的AUC分别为0.92、0.89、0.85（95%置信区间分别为0.86~0.98、0.83~0.95、0.78~0.93，P<0.01），最佳阈值分别为106.5、4.5、1.5分，最佳阈值下的敏感度分别为88.5%、76.9%、73.1%，最佳阈值下的特异度分别为88.5%、87.2%、86.3%。改良Baux评分与比利时烧伤预后评分的AUC质量相近（z=1.25，P>0.05），均明显优于Ryan评分（z值分别为2.35、2.11，P<0.05）。  结论  改良Baux评分、比利时烧伤预后评分、Ryan评分对严重烧伤患者死亡风险均有较好的预测能力，从临床实践考虑，改良Baux评分更适合作为严重烧伤患者的预后预测工具。
综述
烧伤儿童药物镇静镇痛的现状及研究进展
贾梦倩, 袁心刚
2022, 38(2): 190-195. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20200908-00404
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摘要:
儿童是烧伤的高发人群，具有独特的生理、心理和解剖状态，对烧伤儿童的焦虑和疼痛管理极具挑战。非药物干预在烧伤儿童的疼痛管理中很重要，但通常不足以充分治疗疼痛和焦虑，因此药物镇静镇痛是必需的。本综述回顾了该领域国内外近10年来临床治疗及科研进展，包括对烧伤儿童的疼痛评估，镇静镇痛治疗中的监护、主要的治疗药物及研究进展、临床实践中的一些争议，并提出一些建议，以供临床参考。
影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞体外重建的研究进展
郎东浩, 巴特, 曹胜军, 李芳, 董行, 李俊亮, 王凌峰
2022, 38(2): 195-200. doi: 10.3760/cma.j.cn501120-20201020-00442
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摘要:
大面积深度烧伤患者因汗腺毁损导致体温调节功能基本丧失，生活质量受到严重影响。目前对于修复汗腺功能的研究较多，然而人体汗腺发育的机制尚未完全阐明。越来越多的研究表明Wnt/β连环蛋白、外胚叶发育不全/外胚叶发育不全受体/核因子κB、音猬因子、叉头框转录因子等信号通路彼此级联共同影响汗腺发育，并且已有研究报道可以利用级联信号通路实现汗腺样细胞的体外重建。现就影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞的体外重建情况作一综述。

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