留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶的制备及其对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用

刘颖 程凤 王泽薇 金红旭 曹滨验 游平飞 胡安 史秀云 杜娟 苑志新

刘颖, 程凤, 王泽薇, 等. 负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶的制备及其对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用[J]. 中华烧伤与创面修复杂志, 2024, 40(1): 50-56. DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20230928-00101.
引用本文: 刘颖, 程凤, 王泽薇, 等. 负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶的制备及其对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用[J]. 中华烧伤与创面修复杂志, 2024, 40(1): 50-56. DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20230928-00101.
Liu Y,Cheng F,Wang ZW,et al.Preparation of chitin/hyaluronic acid/collagen hydrogel loaded with mouse adipose-derived stem cells and its effects on wound healing of full-thickness skin defects in rats[J].Chin J Burns Wounds,2024,40(1):50-56.DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20230928-00101.
Citation: Liu Y,Cheng F,Wang ZW,et al.Preparation of chitin/hyaluronic acid/collagen hydrogel loaded with mouse adipose-derived stem cells and its effects on wound healing of full-thickness skin defects in rats[J].Chin J Burns Wounds,2024,40(1):50-56.DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20230928-00101.

负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶的制备及其对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用

doi: 10.3760/cma.j.cn501225-20230928-00101
基金项目: 

辽宁省博士科研启动基金 2023-BS-032

详细信息
    通讯作者:

    金红旭,Email:cszx_jhx@163.com

    杜娟,Email:dujuan0512@126.com

Preparation of chitin/hyaluronic acid/collagen hydrogel loaded with mouse adipose-derived stem cells and its effects on wound healing of full-thickness skin defects in rats

Funds: 

Doctoral Research Foundation of Liaoning Province of China 2023-BS-032

More Information
  • 摘要:   目的   制备负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶并探讨其对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。   方法   该研究为实验研究。通过酸水解碱的方法提取甲壳素纳米纤维,将提取物与透明质酸和胶原混合制备甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶(以下简称水凝胶),另制备负载小鼠脂肪干细胞的水凝胶。将30只雄性12周龄豚鼠按照随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和水凝胶组(每组10只),分别在豚鼠背部两侧涂抹乙醇、4-氨基苯甲酸乙酯、前述制备的不含细胞的水凝胶进行诱导接触和激发接触,于激发接触后24、48 h观察皮肤水肿和红斑形成情况。将小鼠脂肪干细胞分为行常规培养的正常对照组和用前述制备的不含细胞的水凝胶培养的水凝胶组,培养3 d,采用蛋白质印迹法检测血小板衍生生长因子-D(PDGF-D)、胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、转化生长因子β 1(TGF-β 1)的蛋白表达(样本数均为3)。取8只雄性8周龄SD大鼠,在其背部两侧各制备1个圆形全层皮肤缺损创面,分别作为空白对照组(不进行任何处理)和水凝胶组(涂抹前述制备的负载脂肪干细胞的水凝胶)。伤后0(即刻)、2、4、8、10 d,观察创面愈合情况并计算伤后2、4、8、10 d的创面愈合率。取伤后10 d创面组织,行苏木精-伊红染色观察新生组织形成情况,采用酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1α(IL-1α)、IL-6、IL-4和IL-10的浓度,行免疫组织化学染色观察CD16、CD206阳性细胞表达并计算阳性细胞百分比。动物实验样本数均为8。   结果   激发接触后24 h,3组豚鼠皮肤均无水肿形成,仅阳性对照组7只豚鼠皮肤出现轻微红斑。激发接触后48 h,阳性对照组8只豚鼠皮肤出现红斑,4只豚鼠皮肤出现水肿;其余2组豚鼠皮肤无明显红斑或水肿。培养3 d,水凝胶组脂肪干细胞中PDGF-D、IGF-Ⅰ和TGF-β 1的蛋白表达水平均明显高于正常对照组( t值分别为12.91、11.83、7.92, P<0.05)。伤后0~10 d,2组创面面积均逐渐缩小,水凝胶组创面于伤后10 d基本愈合。伤后4、8、10 d,水凝胶组创面愈合率分别为(38±4)%、(54±5)%、(69±6)%,分别明显高于空白对照组的(21±6)%、(29±7)%、(31±7)%( t值分别为3.82、3.97、4.05, P值均<0.05)。伤后10 d,与空白对照组比较,水凝胶组创面表皮更加完整,毛囊、血管和其他皮肤附件增多。伤后10 d,水凝胶组创面组织中IL-1α、IL-6浓度均较空白对照组明显降低( t值分别为8.21、7.99, P<0.05),IL-4、IL-10浓度均较空白对照组明显升高( t值分别为6.57、9.03, P<0.05);水凝胶组创面组织中CD16阳性细胞百分比较空白对照组明显降低( t=8.02, P<0.05),CD206阳性细胞百分比较空白对照组明显升高( t=7.21, P<0.05)。   结论   负载小鼠脂肪干细胞的水凝胶无致敏性,能促进脂肪干细胞中生长因子分泌,促进大鼠全层皮肤缺损创面组织中巨噬细胞向M2型极化,减轻炎症反应,从而促进创面愈合。

     

  • (1)制备了无致敏性的、可促进脂肪干细胞中生长因子分泌的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶。

    (2)证实负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶可促进大鼠全层皮肤缺损创面愈合,其可能机制为水凝胶促进了巨噬细胞极化、减轻了炎症反应。

    Highlights:

    (1)A non-allergenic chitin/hyaluronic acid/collagen hydrogel that could promote the secretion of growth factors in adipose-derived stem cells was prepared.

    (2)It was proved that the chitin/hyaluronic acid/collagen hydrogel loaded with mouse adipose-derived stem cells could promote wound healing in rats with full-thickness skin defects, with the possible mechanism by which the hydrogel promoted macrophage polarization and alleviated inflammatory reaction.

    皮肤是人体与外界之间的屏障,多种原因可造成皮肤创面,创面若不能得到及时修复可危及患者生命。目前已有一些敷料能够用于创面修复,但存在治疗效果有限、反复换药可能造成二次损伤等不足。此外,手术治疗适用于部分患者创面的修复,但患者痛苦明显、花费高,后期可能有瘢痕形成,影响患者生活质量 1, 2。因此,亟须寻找有效地促进创面愈合的方法。脂肪干细胞具有来源广泛、易获取等特性,其分泌的胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ)、血小板衍生生长因子-D(platelet-derived growth factor-D,PDGF-D)和TGF-β 1等细胞因子,能显著改善创面愈合环境,进而促进大鼠组织修复 3, 4, 5。目前,脂肪干细胞主要通过局部注射方式进行使用,该方式存在细胞归巢数量少和活性持续时间短等不足;若加大脂肪干细胞使用量会增加细胞的提取成本,同时反复传代易造成细胞老化和“干性”丢失。随着学科的交叉和发展,负载干细胞的生物材料被用于创面修复 6, 7。甲壳素具有良好的生物相容性,能够在皮肤损伤中发挥止血和抗菌作用;透明质酸和胶原作为皮肤组织的重要成分,有利于大鼠创面修复 8, 9, 10。本研究制备负载脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶,探索其在创面愈合中的作用,为进一步有效修复创面提供新策略。

    本实验研究经北部战区总医院伦理委员会审批通过,批号:研伦审第(2023)050号,遵循北部战区总医院和国家有关实验动物管理和使用的相关规定。

    30只健康无特殊病原级12周龄雄性豚鼠,体重250~300 g,购自辽宁长生生物技术有限公司,许可证号:SCXK(辽)2020-0001;8只健康无特殊病原级8周龄雄性SD大鼠,体重180~200 g,购自沈阳腾华生物技术有限公司,许可证号:SCXK(辽)2023-0003。

    小鼠脂肪干细胞及其专用培养基购自赛业(广州)生物科技有限公司。鱿鱼软骨购自当地农贸市场,透明质酸、胶原购自默克化工技术(上海)有限公司。HE染色试剂盒和大鼠IL-1α、IL-6、IL-4、IL-10 ELISA试剂盒及大鼠免疫组织化学试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司,兔抗小鼠PDGF-D、IGF-Ⅰ、CD16、GAPDH单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体购自艾博抗(上海)贸易有限公司,兔抗小鼠TGF-β 1和CD206单克隆抗体购自美国Cell Signaling生物科技有限公司。BX43型光学显微镜购自日本Olympus公司,iMark型酶标仪购自美国伯乐仪器有限公司。

    将鱿鱼软骨洗净干燥后于1 L 0.1 mol/L的盐酸溶液中脱钙20 h,用清水洗涤至中性后,用1 L 40 g/L氢氧化钠溶液处理10 h进行脱蛋白,再用乙酸将溶液酸化至pH值为3,然后用超声波在冰水中处理6 min,制备悬浮液。加入100 g/L透明质酸和100 g/L胶原各200 mL后,以悬浮液3倍体积的脂肪干细胞专用培养基多次处理悬浮液进而形成接近中性的水凝胶。吸取1 mL水凝胶,加入1×10 6个小鼠脂肪干细胞及500 μL专用培养基,制备负载脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶。

    将30只豚鼠适应性饲养7 d后,采用随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和水凝胶组,每组10只。诱导接触:按照0.6 mL/g注射10 g/L戊巴比妥钠麻醉豚鼠后,背部脱毛,在背部左侧2 cm×2 cm的区域分别涂抹体积分数75%乙醇、4-氨基苯甲酸乙酯或1.2中制备的不含细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶0.5 mL,用纱布和玻璃纸覆盖6 h后移除并清洗。诱导7、14 d后分别同前涂抹相应的药物。激发接触:末次诱导14 d后,同前于豚鼠背部右侧相应区域涂抹相同药物。分别在激发接触后24、48 h观察两侧皮肤水肿和红斑形成情况。

    将进行常规培养和用不含细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶培养的1×10 6个小鼠脂肪干细胞分别作为正常对照组和水凝胶组,培养3 d,收集2组细胞,提取细胞内总蛋白并定量,采用蛋白质印迹法进行检测。加入的一抗为兔抗小鼠PDGF-D、IGF-Ⅰ、TGF-β 1和GAPDH单克隆抗体(稀释比均为1∶1 000),二抗为辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体(稀释比为1∶2 000)。采用ImageJ软件(美国国立卫生研究院)行灰度分析,以GAPDH为内参照,计算PDGF-D、IGF-Ⅰ、TGF-β 1的蛋白相对表达量。该实验样本数为3。

    将8只大鼠适应性饲养1周,同前用戊巴比妥钠麻醉后,用剪刀在大鼠背部脊柱两侧皮肤上剪出2个直径1.2 cm的圆形全层皮肤缺损创面。一侧创面不进行任何处理作为空白对照组;另一侧创面涂抹1 mL负载脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶(每天1次),作为水凝胶组。伤后0(即刻)、2、4、8、10 d,观察创面愈合情况并拍照,采用ImageJ软件测量创面面积并计算伤后2、4、8、10 d的创面愈合率。创面愈合率=(伤后0 d创面面积-伤后2、4、8、10 d的创面面积)÷伤后0 d创面面积×100%。该实验样本数为8。

    伤后10 d,于观察创面愈合情况后,将所有大鼠断颈处死后取2组创面组织,部分用于制备石蜡切片(厚5 μm),行HE染色,于光学显微镜100倍放大倍数下观察新生组织结构。

    取1.6中2组部分创面组织进行称重和匀浆,以离心半径8 cm、10 000 r/min离心20 min,取上清液,按照ELISA试剂盒操作说明书检测IL-1α、IL-6、IL-4和IL-10的浓度。该实验样本数为8。

    取1.6中2组部分创面组织,制作厚4 μm的石蜡切片,进行免疫组织化学染色,加入的一抗为兔抗小鼠CD16、CD206单克隆抗体(稀释比均为1∶200),二抗为辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体(稀释比为1∶200),二氨基联苯胺显色,苏木精复染后,于光学显微镜400倍放大倍数下观察CD16、CD206的阳性表达(棕色)情况并计算阳性细胞百分比。该实验样本数为8。

    采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析。计量资料数据均符合正态分布,用 x ¯ ± s 表示,组间总体比较行重复测量方差分析,组间两两比较行独立样本 t检验。 P<0.05为差异有统计学意义。

    激发接触后24 h,3组豚鼠皮肤均无水肿形成,仅阳性对照组7只豚鼠皮肤出现轻微红斑。激发接触后48 h,阳性对照组8只豚鼠皮肤出现红斑,4只豚鼠皮肤出现水肿;其余2组豚鼠皮肤无明显红斑或水肿。

    培养3 d,水凝胶组脂肪干细胞中PDGF-D、IGF-Ⅰ和TGF-β 1的蛋白表达水平均显著高于正常对照组( P<0.05),见 表1

    表1  培养3 d的2组小鼠脂肪干细胞中3种生长因子的蛋白表达比较( x ¯ ± s
    表1.  Comparison of protein expressions of three growth factors in two groups of mouse adipose-derived stem cells after 3 d of culture
    组别 样本数 PDGF-D IGF-Ⅰ TGF-β 1
    正常对照组 3 0.58±0.11 0.18±0.09 0.29±0.13
    水凝胶组 3 1.23±0.09 0.73±0.04 0.72±0.11
    t 12.91 11.83 7.92
    P <0.001 <0.001 <0.001
    注:正常对照组细胞进行常规培养,水凝胶组细胞采用甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶培养;PDGF-D为血小板衍生生长因子-D,IGF-Ⅰ为胰岛素样生长因子Ⅰ,TGF-β 1为转化生长因子β 1
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格

    伤后0~10 d,2组创面面积均逐渐缩小;伤后4、8 d,水凝胶组创面面积均明显小于空白对照组,且水凝胶组创面于伤后10 d基本愈合。伤后4、8、10 d,水凝胶组创面愈合率均明显高于空白对照组( P<0.05)。见 图1表2

    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶
    表2  伤后各时间点2组全层皮肤缺损大鼠创面愈合率比较(%, x ¯ ± s
    表2.  Comparison of wound healing rates in two groups of rats with full-thickness skin defects at various time points after injury
    组别 样本数 2 d 4 d 8 d 10 d
    空白对照组 8 18±5 21±6 29±7 31±7
    水凝胶组 8 18±3 38±4 54±5 69±6
    t 0.88 3.82 3.97 4.05
    P 0.351 0.003 0.001 <0.001
    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;处理因素主效应, F=103.37, P<0.001;时间因素主效应, F=171.90, P<0.001;两者交互作用, F=54.61, P<0.001
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格

    伤后10 d,空白对照组创面有较多细胞碎片、坏死组织和少量表皮再生;而水凝胶组创面仅有少量细胞碎片和坏死组织,再生表皮较空白对照组更加完整,有更多毛囊、血管和其他皮肤附件。见 图2

    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;图2B中箭头指示皮肤附件,2条虚线间为新生表皮

    伤后10 d,水凝胶组创面组织中IL-1α、IL-6浓度均较空白对照组显著降低( P<0.05),IL-4、IL-10浓度均较空白对照组显著升高( P<0.05)。见 表3

    表3  伤后10 d 2组全层皮肤缺损大鼠创面组织中炎症因子浓度比较(pg/mL, x ¯ ± s
    表3.  Comparison of concentrations of inflammatory factors in wound tissue of two groups of rats with full-thickness skin defects at 10 d after injury
    组别 样本数 IL-1α IL-6 IL-4 IL-10
    空白对照组 8 26.7±2.3 39.4±1.7 19.1±1.9 55.1±8.7
    水凝胶组 8 17.1±2.1 18.7±1.1 28.9±1.3 89.8±1.1
    t 8.21 7.99 6.57 9.03
    P <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;IL为白细胞介素
    下载: 导出CSV 
    | 显示表格

    伤后10 d,水凝胶组创面组织中CD16阳性细胞百分比为(28±5)%,较空白对照组的(51±7)%明显降低( t=8.02, P<0.001);CD206阳性细胞百分比为(61±5)%,较空白对照组的(14±8)%明显升高,( t=7.21, P<0.001)。见 图3

    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;CD16和CD206阳性表达均为棕色

    皮肤损伤破坏了人体与外部环境的第1道屏障,除引起疼痛等问题外,创面迁延不愈还可能引发全身疾病,造成严重后果。创面修复是重要临床问题之一,有效促进创面愈合可减轻患者痛苦和家庭负担 11, 12, 13。用于皮肤的材料需要考虑的重要问题是材料的致敏性,临床前研究中常以豚鼠为实验对象,乙醇、4-氨基苯甲酸乙酯可分别作为阴性对照和阳性对照。本研究按照上述方法证实甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶用于豚鼠皮肤无致敏反应,可进一步研究该水凝胶的促创面愈合性能。脂肪干细胞产生的生长因子可能有助于脂肪干细胞更好地发挥促创面愈合作用。材料对细胞的影响是一个复杂的过程,有研究者认为TGF-β 1、PDGF-D和IGF-Ⅰ等生长因子能够促进细胞增殖、分化,进而加快大鼠全层皮肤缺损创面愈合 14, 15, 16。本研究结果显示,用甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶培养后,脂肪干细胞中PDGF-D、TGF-β和IGF-Ⅰ等生长因子表达升高,提示该水凝胶可能有益于创面愈合。

    目前可用于细胞培养和创面修复的生物材料的种类及形态多样。本研究制备的水凝胶能够使创面组织与外界相阻隔。此外,水凝胶还能够提供湿性愈合环境,阻止焦痂的形成和药物更换过程中的二次皮肤损伤 17, 18, 19。本研究团队进一步将制备的负载脂肪干细胞的水凝胶用于大鼠全层皮肤缺损创面,探讨该水凝胶在创面愈合中的作用。结果显示,伤后4、8、10 d,水凝胶组创面愈合率明显高于空白对照组,证实该水凝胶具有明显的促进创面愈合的作用。创面愈合过程中伴随炎症反应的发生。为进一步探讨制备的负载脂肪干细胞的水凝胶对创面炎症的作用,本研究通过检测炎症因子IL-1α、IL-6、IL-4和IL-10的浓度以及M1型巨噬细胞标志CD16和M2型巨噬细胞标志物CD206的表达水平。巨噬细胞具有极化特性,其中M1型巨噬细胞激活会促进IL-6、IL-1和TNF-α等炎症因子的释放;M2型巨噬细胞激活是由抗炎因子IL-4和IL-13诱导的,M2型巨噬细胞激活能够分泌高水平的抑制炎症和免疫的因子IL-10,避免因炎症过度而阻碍创面愈合 20, 21, 22。本研究结果显示,与不进行处理比较,应用负载脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶的大鼠创面组织中IL-1α、IL-6浓度降低,IL-4、IL-10浓度升高,且CD16阳性表达降低,CD206阳性表达升高,说明该水凝胶能够促进创面组织中巨噬细胞向M2型极化,从而减轻炎症反应。

    综上所述,本研究制备的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶无明显皮肤致敏反应,能够促进脂肪干细胞分泌生长因子。负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶应用于大鼠全层皮肤缺损创面,能调控巨噬细胞向M2型极化,减轻创面炎症反应,从而促进创面愈合,具有较好的应用前景。本研究的不足之处是,动物实验中没有单独应用不含脂肪干细胞的水凝胶,该水凝胶在创面修复中的作用还待进一步探讨。

    刘颖:实验操作、论文撰写;程凤、王泽薇、曹滨验、游平飞、胡安、史秀云、苑志新:数据整理、统计学分析;金红旭、杜娟:研究指导、论文修改、经费支持
    所有作者均声明不存在利益冲突
  • 参考文献(22)

    [1] QiL,ZhangC,WangB,et al.Progress in hydrogels for skin wound repair[J].Macromol Biosci,2022,22(7):e2100475.DOI: 10.1002/mabi.202100475.
    [2] 郑力铭,刘钟元,颜鸿宇,等.小檗碱对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制[J].中华烧伤与创面修复杂志,2023,39(11):1072-1082.DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20230411-00120.
    [3] van DongenJA,HarmsenMC,van der LeiB,et al.Augmentation of dermal wound healing by adipose tissue-derived stromal cells (ASC)[J].Bioengineering (Basel),2018,5(4):91. DOI: 10.3390/bioengineering5040091.
    [4] AzamM,GhufranH,ButtH,et al.Curcumin preconditioning enhances the efficacy of adipose-derived mesenchymal stem cells to accelerate healing of burn wounds[J/OL].Burns Trauma,2021,9:tkab021[2023-09-28].https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34514007/.DOI: 10.1093/burnst/tkab021.
    [5] HouL,ZhangX,DuH.Advances in mesenchymal stromal cells and nanomaterials for diabetic wound healing[J].Diabetes Metab Res Rev,2023,39(4):e3638.DOI: 10.1002/dmrr.3638.
    [6] MaziniL,RochetteL,AdmouB,et al.Hopes and limits of adipose-derived stem cells (ADSCs) and mesenchymal stem cells (MSCs) in wound healing[J].Int J Mol Sci,2020,21(4):1306.DOI: 10.3390/ijms21041306.
    [7] XiaS,WengT,JinR,et al.Curcumin-incorporated 3D bioprinting gelatin methacryloyl hydrogel reduces reactive oxygen species-induced adipose-derived stem cell apoptosis and improves implanting survival in diabetic wounds[J/OL].Burns Trauma,2022,10:tkac001[2023-09-28].https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35291229/.DOI: 10.1093/burnst/tkac001.
    [8] BaharloueiP,RahmanA.Chitin and chitosan: prospective biomedical applications in drug delivery, cancer treatment, and wound healing[J].Mar Drugs,2022,20(7):460.DOI: 10.3390/md20070460.
    [9] KafiMA,AktarMK,PhannyY,et al.Adhesion, proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cell on chitosan/collagen composite scaffold[J].J Mater Sci Mater Med,2019,30(12):131.DOI: 10.1007/s10856-019-6341-8.
    [10] 李伟,孔维诗,包郁露,等.负载脂肪干细胞的皮肤组织工程支架在创面修复中的研究进展[J].中华烧伤与创面修复杂志,2023,39(11):1090-1095.DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20221123-00502.
    [11] PrasathkumarM,SadhasivamS.Chitosan/hyaluronic acid/alginate and an assorted polymers loaded with honey, plant, and marine compounds for progressive wound healing-know-how[J].Int J Biol Macromol,2021,186:656-685.DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2021.07.067.
    [12] LiQ,ZhaoH,ChenW,et al.Human keratinocyte-derived microvesicle miRNA-21 promotes skin wound healing in diabetic rats through facilitating fibroblast function and angiogenesis[J].Int J Biochem Cell Biol,2019,114:105570.DOI: 10.1016/j.biocel.2019.105570.
    [13] LiuY,LiuY,WuM,et al.Adipose-derived mesenchymal stem cell-loaded β-chitin nanofiber hydrogel promote wound healing in rats[J].J Mater Sci Mater Med,2022,33(2):12.DOI: 10.1007/s10856-021-06630-7.
    [14] AlanS,ŞalvaE,Yılmazİ,et al.The effectiveness of chitosan-mediated silencing of PDGF-B and PDGFR-β in the mesangial proliferative glomerulonephritis therapy[J].Exp Mol Pathol,2019,110:104280.DOI: 10.1016/j.yexmp.2019.104280.
    [15] SalehH,El-ShorbagyHM.Chitosan protects liver against ischemia-reperfusion injury via regulating Bcl-2/Bax, TNF-α and TGF-β expression[J].Int J Biol Macromol,2020,164:1565-1574.DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2020.07.212.
    [16] van SteenbergheM,SchubertT,GuiotY,et al.Improvement of mesh recolonization in abdominal wall reconstruction with adipose vs. bone marrow mesenchymal stem cells in a rodent model[J].J Pediatr Surg,2017,52(8):1355-1362.DOI: 10.1016/j.jpedsurg.2016.11.041.
    [17] RavishankarK,VenkatesanM,DesinghRP,et al.Biocompatible hydrogels of chitosan-alkali lignin for potential wound healing applications[J].Mater Sci Eng C Mater Biol Appl,2019,102:447-457.DOI: 10.1016/j.msec.2019.04.038.
    [18] LiangY,ZhaoX,HuT,et al.Adhesive hemostatic conducting injectable composite hydrogels with sustained drug release and photothermal antibacterial activity to promote full-thickness skin regeneration during wound healing[J].Small,2019,15(12):e1900046.DOI: 10.1002/smll.201900046.
    [19] NiZ,YuH,WangL,et al.Polyphosphazene and non-catechol-based antibacterial injectable hydrogel for adhesion of wet tissues as wound dressing[J].Adv Healthc Mater,2022,11(1):e2101421.DOI: 10.1002/adhm.202101421.
    [20] DavisFM,GallagherKA.Epigenetic mechanisms in monocytes/macrophages regulate inflammation in cardiometabolic and vascular disease[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2019,39(4):623-634.DOI: 10.1161/ATVBAHA.118.312135.
    [21] ShiC,YuanF,LiZ,et al.MSN@IL-4 sustainingly mediates macrophagocyte M2 polarization and relieves osteoblast damage via NF-κB pathway-associated apoptosis[J].Biomed Res Int,2022,2022:2898729.DOI: 10.1155/2022/2898729.
    [22] YangT,TanY,ZhangW,et al.Effects of ALA-PDT on the healing of mouse skin wounds infected with pseudomonas aeruginosa and its related mechanisms[J].Front Cell Dev Biol,2020,8:585132.DOI: 10.3389/fcell.2020.585132.
  • 1  伤后各时间点2组全层皮肤缺损大鼠创面愈合情况。1A、1B、1C、1D、1E.分别为空白对照组伤后0(即刻)、2、4、8、10 d创面情况;1F、1G、1H、1I、1J.分别为水凝胶组伤后0、2、4、8、10 d创面情况,图1H、1I、1J创面面积分别小于图1C、1D、1E

    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶

    2  伤后10 d 2组全层皮肤缺损大鼠创面新生组织情况 苏木精-伊红×100。2A.空白对照组皮肤附件较少;2B.水凝胶组皮肤附件较图2A增多,新生表皮较图2A更完整

    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;图2B中箭头指示皮肤附件,2条虚线间为新生表皮

    3  2组全层皮肤缺损大鼠伤后10 d创面组织中CD16和CD206阳性细胞情况 二氨基联苯胺-苏木精×400。3A.空白对照组CD16阳性表达多;3B.水凝胶组CD16阳性表达,较图3A明显减少;3C.空白对照组CD206阳性表达少;3D.水凝胶组CD206阳性表达,较图3C增多

    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;CD16和CD206阳性表达均为棕色

    表1  培养3 d的2组小鼠脂肪干细胞中3种生长因子的蛋白表达比较( x ¯ ± s

    表1.   Comparison of protein expressions of three growth factors in two groups of mouse adipose-derived stem cells after 3 d of culture

    组别 样本数 PDGF-D IGF-Ⅰ TGF-β 1
    正常对照组 3 0.58±0.11 0.18±0.09 0.29±0.13
    水凝胶组 3 1.23±0.09 0.73±0.04 0.72±0.11
    t 12.91 11.83 7.92
    P <0.001 <0.001 <0.001
    注:正常对照组细胞进行常规培养,水凝胶组细胞采用甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶培养;PDGF-D为血小板衍生生长因子-D,IGF-Ⅰ为胰岛素样生长因子Ⅰ,TGF-β 1为转化生长因子β 1
    下载: 导出CSV

    表2  伤后各时间点2组全层皮肤缺损大鼠创面愈合率比较(%, x ¯ ± s

    表2.   Comparison of wound healing rates in two groups of rats with full-thickness skin defects at various time points after injury

    组别 样本数 2 d 4 d 8 d 10 d
    空白对照组 8 18±5 21±6 29±7 31±7
    水凝胶组 8 18±3 38±4 54±5 69±6
    t 0.88 3.82 3.97 4.05
    P 0.351 0.003 0.001 <0.001
    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;处理因素主效应, F=103.37, P<0.001;时间因素主效应, F=171.90, P<0.001;两者交互作用, F=54.61, P<0.001
    下载: 导出CSV

    表3  伤后10 d 2组全层皮肤缺损大鼠创面组织中炎症因子浓度比较(pg/mL, x ¯ ± s

    表3.   Comparison of concentrations of inflammatory factors in wound tissue of two groups of rats with full-thickness skin defects at 10 d after injury

    组别 样本数 IL-1α IL-6 IL-4 IL-10
    空白对照组 8 26.7±2.3 39.4±1.7 19.1±1.9 55.1±8.7
    水凝胶组 8 17.1±2.1 18.7±1.1 28.9±1.3 89.8±1.1
    t 8.21 7.99 6.57 9.03
    P <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
    注:空白对照组创面不进行任何处理,水凝胶组创面涂抹负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶;IL为白细胞介素
    下载: 导出CSV
  • 加载中
图(4) / 表(3)
计量
  • 文章访问数:  4650
  • HTML全文浏览量:  145
  • PDF下载量:  51
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2023-09-28

目录

/

返回文章
返回