摘要:
目的 探讨二甲双胍对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（Fb）增殖及凋亡的影响及其机制。 方法 该研究为实验研究。收集于2020年9月—2023年9月在西安交通大学第一附属医院整形美容·颌面外科接受瘢痕疙瘩切除术治疗的7例瘢痕疙瘩患者（男2例、女5例,年龄20~65岁,病程均>1年）的瘢痕疙瘩组织,分离、培养原代Fb并选取第3~6代细胞进行实验。将细胞分为对照组和二甲双胍组,均采用完全培养基培养,二甲双胍组培养基中另加入终物质的量浓度为60 mmol/L的二甲双胍。采用细胞计数试剂盒-8检测2组细胞培养12、24 h后增殖活性并计算二甲双胍组细胞培养12、24 h后增殖抑制率（样本数为6）,采用细胞凋亡检测试剂盒检测对照组细胞培养0 h（即刻）后和二甲双胍组细胞培养12、24 h后凋亡细胞分布情况（样本数为3）,采用细胞周期检测试剂盒检测2组细胞培养12、24 h后周期分布（样本数为3）。将2组适量细胞培养24 h后进行真核mRNA测序,筛选2组间差异表达显著的差异表达基因（DEG）后,进行京都基因和基因组百科全书功能注释分析与功能富集分析。采用蛋白质印迹法检测2组细胞培养24 h后磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路中PI3K、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达（样本数为3）。 结果 培养12、24 h后,二甲双胍组细胞增殖活性均显著低于对照组（t值分别为4.70、24.02,P<0.05）；二甲双胍组细胞培养24 h后增殖活性显著高于组内培养12 h后（t=4.73,P<0.05）。与组内培养12 h后比较,二甲双胍组细胞培养24 h后增殖抑制率显著升高（t=5.29,P<0.05）。与对照组培养0 h后比较,二甲双胍组细胞培养12、24 h后早期凋亡细胞比例均显著升高（t值分别为6.62、4.58,P<0.05）,早期凋亡+晚期凋亡细胞比例均显著升高（t值分别为4.84、3.75,P<0.05）；二甲双胍组细胞培养24 h后晚期凋亡细胞比例显著高于组内培养12 h后（t=4.55,P<0.05）。培养12 h后,二甲双胍组S期细胞比例显著低于对照组（t=5.90,P<0.05）；培养24 h后,与对照组比较,二甲双胍组G0/G1期细胞比例显著升高（t=5.36,P<0.05）,G2/M期细胞比例显著降低（t=17.63,P<0.05）；二甲双胍组培养24 h后S期细胞比例显著高于组内培养12 h后（t=7.60,P<0.05）。培养24 h后,与对照组相比,从二甲双胍组细胞中检测到4 814个差异表达显著的DEG,显著上调和显著下调的DEG主要参与了信号转导、细胞生长与死亡、运输与分解代谢、内分泌系统、免疫系统以及癌症相关的生物学功能；差异表达显著的DEG显著富集的通路包括细胞周期、DNA复制等,且在PI3K/Akt信号通路方面基因数量最多。培养24 h后,二甲双胍组细胞的PI3K、p-Akt与p-mTOR蛋白表达分别为0.190±0.017、0.170±0.017、0.247±0.005,显著低于对照组的0.440±0.026、0.300±0.060、0.547±0.025（t值分别为13.69、3.61、20.12,P值均<0.05）。 结论 二甲双胍可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路显著抑制人瘢痕疙瘩Fb增殖,同时有效诱导其凋亡过程,从而发挥抗纤维化作用。
乌梦璐, 王瑞, 郑昕楠, 等. 二甲双胍对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的影响及其机制[J]. 中华烧伤与创面修复杂志, 2025, 41(4): 355-363. DOI: 10.3760/cma.j.cn501225-20241216-00489.
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